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本研究以蛹虫草为材料,通过液体深层发酵技术获取蛹虫草胞外多糖提取物,并探讨蛹虫草胞外多糖提取物对氧嗪酸钾盐所致高尿酸血症小鼠血尿酸的影响。同时,以蛹虫草菌丝体片段为材料,本研究亦探讨秋水仙素对蛹虫草的重要次生代谢产物虫草素产量的影响。具体实验方法及结果如下: 1.本实验通过离心、浓缩、去蛋白、醇沉、脱色、透析等一系列工艺手段,从蛹虫草深层发酵的发酵液中获得蛹虫草胞外多糖提取物。通过生化实验测得蛹虫草胞外多糖提取物中总糖含量为65.1%,还原糖含量为4.00%,蛋白质含量为0.21%。 2.小鼠生理生化实验。实验方法如下:取雄性昆明小鼠60只,随机分为6组(n=10):正常组、模型组(potassiumoxonate250mg/kg.d)、阳药组(别嘌呤醇,5mg/(kg.d))、胞外多糖提取物低、中、高剂量组(200mg/kg.d、400mg/kg.d、800mg/kg.d)。除正常组外,其他组每天按250mg/kg的剂量腹腔注射氧嗪酸钾盐,在腹腔注射氧嗪酸钾盐前1h禁食不禁水;1h后各组分别灌胃给药。7d后,观察蛹虫草胞外多糖提取物对高尿酸血症小鼠血尿酸含量、血尿素氮含量(BUN)、黄嘌呤氧化酶(XOD)活性、腺苷脱氨酶(ADA)的活性以及脏器指数的影响。 实验结果显示,中剂量组(400mg/kg.d)的蛹虫草胞外多糖提取物能极显著降低XOD的活性,促使血尿酸水平降低至与正常组相比无显著差异,并极显著降低BUN浓度。这表明蛹虫草胞外多糖提取物具有潜在的降尿酸和保护肾脏作用,其中降尿酸作用机制可能与降低XOD活性有关。 3.在提高虫草素产量的实验中,以蛹虫草菌丝体片段为材料,用秋水仙素对蛹虫草菌丝体片段进行处理,方法如下:先摸索秋水仙素的较好的效应浓度范围,再以秋水仙素浓度、菌丝片段悬液、作用时间三个因素设计三因素三水平的正交实验,用高效毛细管电泳仪(HPCE)检测发酵液中的虫草素的含量。 实验结果表明:3个因素中,秋水仙素浓度对虫草素产量的影响最大,菌丝片段悬液次之,作用时间的影响最小。其中,秋水仙浓度的变化能显著影响虫草素产量的变化。促使虫草素产量增高的最佳组合为:秋水仙素浓度3mg/ml,菌丝片段悬液3ml,处理时间10min。根据此最佳组合作用得到的虫草素产量高于原始菌株分泌的虫草素量约5.77倍。