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目的:兔肌内植入人羊膜间充质细胞(hAMCs)复合聚乳酸-羟基乙酸共聚物/β-磷酸三钙(PLGA/β-TCP)多孔支架材料,观察成骨情况,为将来运用于临床修复骨缺损提供实验基础。
方法:分离获取hAMCs,体外培养,扩增。用流式细胞仪检测细胞表面分子CD11b,CD19,CD34,CD44,CD45,CD73,CD90,CD105等表达情况。并通过免疫细胞化学染色方法检测波形蛋白对细胞表型进行鉴定。第三代hAMCs经成骨诱导,使其向成骨细胞分化,通过碱性磷酸酶及茜素红染色,进行成骨鉴定。将诱导后的细胞接种于PLGA/β-TCP上,形成细胞-材料复合物,植入9只兔右侧背部肌内,并在左侧对称部位植入PLGA/β-TCP作为对照。术后4、8、12周取材,行大体标本观察,HE染色及12周时骨钙素免疫组化染色检测成骨情况。
结果:1.hAMCs高表达CD44,CD73,CD90,CD105,不表达CD34,CD45,CD11b,CD19等,表达波形蛋白;
2.hAMCs经成骨诱导后,碱性磷酸酶染色和钙结节茜素红染色均阳性表达;
3.术后4周,实验组和对照组均未见新生骨组织,支架材料降解不明显,实验组见散在成骨样细胞,偶可见新生血管;8周时,实验组支架材料部分降解,支架内见有新生血管生成,有成骨细胞聚集,并有少许钙质沉积;对照组镜下见纤维组织生长,未见成骨。12周时,实验组支架材料已大部分降解,周边钙质沉积量较8周时增多,可见新生骨质结构;对照组支架材料进一步降解,但无明显新生骨质,只见纤维组织及新生血管。
4.术后12周,骨钙素(BGP)免疫组化示:实验组见BGP阳性表达,对照组阴性表达。
结论:1.hAMCs可在体外分离,培养,成骨诱导分化,有望成为骨组织工程的种子细胞;
2.PLGA/β-TCP复合材料具有良好的生物相容性,是一种良好的骨组织工程支架材料;
3.经成骨诱导的hAMCs复合PLGA/β-TCP支架材料在有免疫力动物体内异位成骨作用明显,单纯PLGA/β-TCP支架材料植入无成骨作用;
4.兔肌袋模型是较理想的异位成骨模型。