ⅣfimA型牙龈卟啉单胞菌脂多糖刺激人脐静脉内皮细胞产生内皮素1与一氧化氮的研究

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目的:分析Ⅳ fimA型P.gingivalis脂多糖(lipopolys accharides,LPS)在不同浓度下刺激人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)产生内皮素-1(endothelin-1,ET-1)和一氧化氮(nitric oxide,NO)可能的影响。   方法:1.厌氧条件下培养ⅣfimA型P.gingivalis(W83),脂多糖提取试剂盒提取P.gingivalis-LPS,并通过鲎试验、SDS-PAGE对所提取的脂多糖进行鉴定;2.体外培养HUVECs(CRL-2480),待细胞单层融合后,加入不同终浓度的P.gingivalis-LPS(0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml)共同培养2h、8h、24h、48h,酶联免疫吸附法(ELISA法)和硝酸还原酶法分别检测上清液中ET-1和NO的水平。   结果:1.Ⅳ fimA型P.gingivalis-LPS对HUVECs的刺激作用具有时间依赖性,随刺激时间的延长,ET-1的释放量增加(P<0.05);ⅣfimA型Pgingivalis-LPS刺激HUVECs释放ET-1的量增加,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);2h、8h和48h时,ET-1的量随LPS浓度的增加而减少(P<0.05),存在浓度依赖性。   2.ⅣfimA型P.gingivalis-LPS刺激HUVECs释放NO的量随时间的延长而增加(P<0.05),具有时间依赖性;2h时,ⅣfimA型P.gingivalis-LPS的1、2、5、10μg/ml及24h、48h时的高浓度(5、10μg/ml)刺激HUVECs释放NO的量增加,与阴性对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05),且具有浓度依赖性。   结论:ⅣimA型P.gingivalis可能通过其LPS刺激血管内皮细胞并使之分泌ET-1和NO发生异常,从而导致内皮细胞功能紊乱和炎症反应过程,促进As的发生和发展。
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