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目的 实行肝脏外科手术时，肝脏要经历缺血再灌注过程。肝脏对缺血耐受力较低，肝脏缺血再灌注后，由于脂质过氧化反应增强、氧自由基的大量形成等导致肝细胞不同程度的损伤和代谢紊乱。热休克蛋白70(heat shock protein 70，HSP70)是机体在受到应激刺激时产生的一种内源性保护性蛋白质，能提高细胞耐受力。HSP70在肝脏缺血再灌注中的保护作用已被证实，但其保护作用的确切机制至今尚不清楚。本实验制备了大鼠热应激预处理与非预处理动物模型，对比观察了两组动物肝脏缺血再灌注后不同时间点肝脏HSP70的表达，SOD活力和MDA的产生量，血清AST、ALT的活性及肝脏病理组织学改变。探讨热应激预处理诱导产生的HSP70对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用的机制。 方法 1．动物分组及模型制备 (1)动物分组 实验动物随机分为(热应激预处理组(HP+IR组) 非预处理组(IR组) (2)模型制备 肝脏缺血再灌注损伤模型：应用Pringle’s法制备大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型。用10％乌拉坦5ml／kg腹腔注射麻醉，沿腹白线正中切开腹部，游离肝门韧带，用无损伤血管夹夹闭肝蒂使肝脏缺血30分钟，去夹恢复血流进行再灌注。 热应激模型制备：动物麻醉后暴露肝脏，将温度传感器探头包埋于肝左外侧叶下，外接二道生理记录仪描记肝脏温度变化，用电吹风对肝脏进行局部加热，约15分钟使肝脏温度达42±0.5℃，维持15分钟后停止加热，关闭腹腔。 2．指标检测 (l)肝脏HS即0的表达 采用链酶亲和素一生物素一酶复合物(SABC)法。阴性对照采用PBS代替一抗。 (2)SOD活力和MDA的产生量 采用黄镖吟氧化酶法测定肝组织SOD活力;硫代巴比妥酸(TBA)法测定肝组织MDA含量。 (3)大鼠血清门冬氨酸转氨酶(aspartate transarninase，AsT)，丙氨酸转氨酶(alaninetransaminase，ALT)的活性 采集的血清在72小时内以全自动生化分析仪测定血清AST、ALT的活性。 (4)肝脏形态学观察 肝组织标本用10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋、切片，HE染色，光镜下观察肝脏病理组织学改变。 另取小块肝组织用2.5%戊二醛固定，按透射电镜要求制片，常规铅铀双染色，电镜下观察肝脏组织学改变。 3.显微图像分析 用数码相机拍照后，将图像输人计算机，应用图像分析软件，在同等条件下测量各部位HSP7O阳性反应产物平均灰度值和整合光密度值。 4.统计学处理 数据以均数士标准差(又士s)表示，采用Excel软件进行t检验。结果 1.肝脏组织切片经免疫组化染色后，HSP7O阳性反应产物呈棕黄色颗粒，位于胞浆和胞核。显微图像分析结果发现，热应激后HS即0表达开始升高，在12小时达高峰，以后随时间推移而降低。 2.两组实验动物各时间点肝脏HSP70的表达均随缺血再灌注时间延长而降低，但热应激预处理组比同一时间点非预处理组要高(p<0 .01)。 3.两组实验动物SOD的活力均随缺血再灌注时间延长而降低，但热应激预处理组均比非预处理组同一时间点高(p<0.01)。 4.MDA的产生量在两组实验动物均随缺血再灌注时间延长而升高，且热应激预处理组较同一时间点非预处理组低(p<0.01)。 5.动物血清AST、ALT酶活性在两组实验动物均随缺血再灌注时间延长而升高，但热应激预处理组较同一时间点非预处理组低(p<0 .01)。 6.肝脏标本IIE染色发现，IR组肝细胞损伤较重，肝细胞索及肝窦界限不清，大量的肝细胞变性、溶解;HP+IR组损伤较班组轻，肝组织结构尚清晰，仅见少量肝细胞浊肿、变性。 7.电镜观察可见HP+IR组肝细胞界限清楚，大体结构正常，细胞内少量线粒体肿胀，部分线粒体可观察到蜻的存在，也可见到内质网，有少量脂滴，少量淋巴细胞浸润。IR组细胞界限不清，细胞内大量线粒体肿胀、破裂、溶解，部分细胞核固缩、核边集，有大量脂滴积存，有淋巴细胞浸润。结论 1.热应激预处理后，肝脏缺血再灌注损伤减轻，提示热应激预处理可能对肝脏缺血再灌注损伤有保护作用。 2.肝脏HSP70的表达越高，SOD活力也越大，同时发现肝脏缺血再灌注损伤减少，提示热应激预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用可能与HS种0的表达和SOD活力有关。