【摘 要】
：
研究背景:索拉非尼是第一个被批准应用于晚期肝癌治疗的分子靶向药物,它可以通过多激酶活性、多靶点信号转导阻断肝癌细胞增殖通路,因而可以使晚期肝癌病人生存期延长,但平均延长时间仅约3个月。因此,如何增强其抗癌疗效是目前亟待解决问题。有研究发现,肝癌细胞可能通过内质网应激途径对索拉非尼产生耐药或逃逸。PERK是细胞内质网应激中关键蛋白之一,在索拉非尼持续作用下,PERK呈持续性升高且促使细胞走向死亡。近
【基金项目】
：
项目名称:非折叠蛋白反应介导的肝癌细胞自噬后生死转归机制及靶向干预研究,项目合同编号:2015GXNSFDA139022,项目来源:广西自然科学基金,项目起止时间:2015.09-2018.08; 项目名称:线粒体自噬 NIX和Pink1信号交互作用对索拉非尼治疗肝癌的影响及干预研究,项目合同编号:81860654,项目来源:国家自然科学基金 地区科学基金项目,项目起止时间:2019.01-202
论文部分内容阅读
研究背景:索拉非尼是第一个被批准应用于晚期肝癌治疗的分子靶向药物,它可以通过多激酶活性、多靶点信号转导阻断肝癌细胞增殖通路,因而可以使晚期肝癌病人生存期延长,但平均延长时间仅约3个月。因此,如何增强其抗癌疗效是目前亟待解决问题。有研究发现,肝癌细胞可能通过内质网应激途径对索拉非尼产生耐药或逃逸。PERK是细胞内质网应激中关键蛋白之一,在索拉非尼持续作用下,PERK呈持续性升高且促使细胞走向死亡。近年来,研究显示索拉非尼可以诱导肝癌细胞内钙释放,且这种钙释放可能与内质网蛋白的激活有关。因此,本研究旨在探索NAADP拮抗剂trans-Ned-19是否可以影响索拉非尼诱导肝癌细胞钙释放及PERK蛋白表达,进而为寻求增强索拉非尼抗癌效果提供一个新视角。方法:将肝癌HepG2细胞系保存在含10%胎牛血清的DMEM中,并以不同密度在培养皿或瓶中培养,用于以下设计研究。用western blot检测不同浓度的氯化钙（0-800μM）作用24小时后HepG2细胞内PERK表达变化。在存在或不存在trans-Ned-19（NAADP拮抗剂100μM）的情况下,予索拉非尼（20μM）在不同时间（0-24h）处理HepG2细胞;利用Lionheart LX全自动显微镜连续记录细胞内钙信号变化;通过western blot检测HepG2细胞中PERK、P-e IF2α、caspase-3、cleaved-PARP蛋白的表达水平;分别以光镜观察细胞形态学及流式细胞术检测细胞凋亡率;用台盼蓝染色检测细胞死亡率。结果:1.western blot结果显示,一定细胞外钙浓度范围内,PERK蛋白表达随着细胞外钙浓度增加而逐渐减少。2.与单用索拉非尼组相比,Lionheart LX全自动显微镜结果显示联合trans-Ned-19显著减少索拉非尼诱导的HepG2细胞内钙释放。3.western bolt分析显示,trans-Ned-19联合索拉非尼作用可以增加索拉非尼诱导的PERK、P-e IF2α蛋白表达;同时使caspase-3表达减少、cleaved-PARP表达增加。4.流式细胞术检测显示,联合trans-Ned-19可以使细胞凋亡率增加约9.48%,且P<0.05;相同条件下处理至24小时,显微镜下观察显示,联合组可以明显抑制细胞生长并导致细胞形态异常改变。5.台盼蓝染色检测结果显示,联合trans-Ned-19可以进一步增加索拉非尼杀伤作用。结论:我们的初步数据表明,trans-Ned-19可以抑制索拉非尼诱导的钙释放,并促进PERK蛋白表达和细胞凋亡水平。联合trans-Ned-19可以显着增强索拉非尼在肝癌细胞中的杀伤作用,这表明NAADP拮抗剂与索拉非尼的联合用药在肝癌治疗方面可能具有潜在的应用价值。
其他文献
背景:社会经济的发展和生活水平的提高增加了国民的平均年龄,我国现已进入人口老龄化社会,脆性骨折疾病的治疗和预防得到重视,受到临床越来越多的关注。目前国际上通用的诊断骨质疏松和评估骨质疏松性骨折的方法是双能X线吸收法（DXA）测量骨密度和世界卫生组织推荐的10年骨折风险评估工具（FRAX）。临床中发现,DXA测定骨密度值和FRAX的单独使用,在诊断脆性骨折和骨折风险评估上存在局限性,如DXA不能反映
目的分析M1和M2型肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophages,TAM）在肝癌组织中的分布差异与肝癌患者预后相关性。分析TAM-M1极化基因SPON2在肝癌细胞中的表达变化,在人肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）细胞株中敲低miR-210-5p研究miR-210-5p是否通过调控SPON2引起肝癌细胞对索拉非尼敏感性的改变。方法使用
目的:经皮左心耳封堵术作为近年新兴的一项技术,经过十余年的临床应用已取得了十分快速的发展,并且在国内各大医院逐渐开展。目前已经有在非瓣膜性心房颤动患者中,将左心耳封堵术与服用华法林抗凝治疗在预防血栓栓塞方面的对比研究,但是左心耳封堵术与服用新型口服抗凝药物利伐沙班在预防血栓栓塞方面的对比研究较少。本研究的主要目的是观察在9个月随访中行左心耳封堵术后及口服利伐沙班抗凝治疗,有无脑血管、周围血管血栓栓
目的:观察超声引导胸椎旁间隙注射罗哌卡因地塞米松混合液用于肺癌术后多模式镇痛的效果及不良反应。方法:这是一项随机、单盲、对照研究,选择了广西医科大学附属肿瘤医院择期行胸腔镜肺癌根治术60例患者进行分析。将60例肺癌患者随机分配成三组,A组、（空白组）;B组、（罗哌卡因）;C组、（罗哌卡因地塞米松混合液组）。拔管时（T1）、拔管后1小时（T2）、术后2小时（T3）、术后4小时（T4）、术后8小时（T
目的:本研究旨在探讨RSK4通过调节PI3K/Akt信号通路逆转乳腺癌阿霉素耐药的作用及分子机制。方法:1.利用KM plotter和ROC Plotter在线工具分析RSK4表达水平与乳腺癌总生存率的相关性以及对阿霉素疗效的影响。2.选取乳腺癌MCF-7细胞为研究对象,采用DOX浓度递增法,构建乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/DOX,应用实时荧光定量PCR（q RT-PCR）和蛋白质免疫印迹法
目的:评估重组人血管内皮抑制素联合含铂方案治疗晚期三阴性乳腺癌的疗效及安全性。方法:回顾性分析2016年01月至2020年05月在广西医科大学附属肿瘤医院收治的晚期三阴性乳腺癌21例,均接受重组人血管内皮抑制素联合含铂方案治疗。其中18例重组人血管内皮抑制素的用药方案为15mg/m~2/24h,第1～7天持续静脉泵入,21天为1个周期,3例由于拒绝深静脉置管,无法进行持续静脉泵入,用药方案为15m
目的通过总结1例X-连锁肾上腺脑白质营养不良（X-linked-adrenoleukodystrophy,X-ALD）家系患者的临床表现、遗传特征、治疗、随访的经验及相关文献回顾,提高临床医生对X-ALD的认识,做到早诊断、治疗,正确进行遗传咨询。方法1.收集先证者及其家庭成员的临床和实验室资料。2.应用二代测序技术对先证者行肾上腺疾病相关基因（包括ABCD1、AKR1B1、ATF3、AXL、CY
目的:本文以模型动物秀丽隐杆线虫（以下简称:线虫,Caenorhabditis elegans）,浸泡于不同浓度地塞米松稀释液中一定时间,观察线虫的生理水平（寿命、生殖能力、运动行为）、生化水平（细胞凋亡）以及分子水平（部分相关胁迫基因表达）的改变情况,探讨地塞米松对线虫造成的毒性效应,从而推断地塞米松的作用机理。方法:利用K-medium溶液进行地塞米松稀释液配制,将线虫分别暴露在终浓度为500
目的:研究可释放CGRP的硼硅酸盐生物活性玻璃（Borosilicate bioactive glass,BBG）复合支架的制备方法及支架的理化性质,体外初步探索复合支架的生物相容性及成骨特性。方法:材料学实验:（1）使用组分为6Na2O--8K2O--8Mg O--22Ca O--27B2O3--27Si O2--2P2O5（mol%）的玻璃粉末,通过3D打印技术（Three-dimension
目的:观察特发性膜性肾病（IMN）患者服用活性维生素D（VDRA）联合营养性维生素D（NVD）治疗6个月的临床疗效,为临床诊治IMN提供新的依据。方法:本研究为非随机同期对照试验,纳入了2017年9月至2019年9月首次确诊IMN伴血清25-羟基维生素D[25（OH）D]0.05）。1.2治疗前实验室指标的比较:两组间的24h尿蛋白、25（OH）D、白蛋白（ALB）水平等实验室指标差异均无统计学意