【摘 要】
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副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis，Hps)常引起猪的多发性浆膜炎、关节炎以及脑膜炎，由该菌引起的病又称为猪革拉泽氏病(Glassers Disease)。随着世界养猪业的发展，该病已成为
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副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis，Hps)常引起猪的多发性浆膜炎、关节炎以及脑膜炎，由该菌引起的病又称为猪革拉泽氏病(Glassers Disease)。随着世界养猪业的发展，该病已成为全球范围内影响养猪业的一种重要细菌性疾病。
副猪嗜血杆菌在实验室分离培养困难，生长条件苛刻，需要高营养成分和特殊的生长因子烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD，又称辅酶Ⅰ)。本研究在临床上分离获得7株副猪嗜血杆菌。通过形态观察、培养特性和生化试验对分离获得的可疑菌株进行初步鉴定，再通过副猪嗜血杆菌16S rRNA基因的特异性引物进行PCR鉴定。试验结果表明，有7株分离菌株扩增出了821 bp的特异性目的条带，结合形态观察、培养特性和生化试验鉴定，结果表明成功分离到了7株副猪嗜血杆菌；药敏试验结果显示，分离菌株对氨苄西林、多粘菌素和庆大霉素等药物敏感。
本研究根据GenBank上发表的副猪嗜血杆菌16S rRNA基因序列(登录号为M75065)设计2对引物，建立了巢式PCR检测体系，并将其扩增产物克隆到pMD-18T载体上后进行测序分析。结果表明，该方法能够扩增出628bp的片段，将其克隆到pMD-18T载体上后，测序分析表明与16S rRNA基因(M75065)的序列同源性达96.8％以上。该PCR检测方法特异性强，对多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌、单核细胞增生性李斯特菌、猪链球菌、金黄色葡萄球菌、胸膜肺炎放线杆菌及沙门氏菌的扩增结果均为阴性；其次，敏感性高，最低检测细菌限为1.38CFU/mL。该检测方法的成功构建为副猪嗜血杆菌的检测和流行病学调查提供了有力的技术支持。
为建立副猪嗜血杆菌的血清学诊断方法，提取了Hps标准血清5型菌株的外膜蛋白(OMP)，并以之为抗原建立了间接血凝试验(IHA)抗体检测方法。绵羊红细胞醛化的最佳条件为30℃作用5h，5型菌株抗原致敏红细胞的最佳浓度为125μg/mL。对15种Hps血清型阳性血清进行检测，结果均为阳性：对猪瘟病毒、口蹄疫病毒、猪圆环病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪生殖与呼吸综合征病毒、猪肺炎支原体、猪链球菌、猪多杀性巴氏杆菌、猪支气管败血波氏杆菌及胸膜肺炎放线杆菌阳性血清进行检测，其中胸膜肺炎放线杆菌和伪狂犬病毒的间接血凝试验抗体检测结果为1：4，有微弱交叉反应；其余均为阴性。实验结果表明该方法的敏感性为琼脂扩散试验的16～64倍，敏感性高。同时结果也表明，该方法特异性强，重复性好，可为广大兽医化验人员提供一种简单、快速及经济的检测副猪嗜血杆菌抗体的方法，为副猪嗜血杆菌病的诊断和防治提供一种有效的手段。
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