【摘 要】
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免疫抑制剂广泛应用于临床,降低了急性排斥反应的发生率,使移植受者的长期与近期存活率都有所提高,然而免疫抑制剂长期蓄积的毒副作用导致慢性药物性损伤,制约了长期存活率的进一
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免疫抑制剂广泛应用于临床,降低了急性排斥反应的发生率,使移植受者的长期与近期存活率都有所提高,然而免疫抑制剂长期蓄积的毒副作用导致慢性药物性损伤,制约了长期存活率的进一步提高。
活化T细胞表面诱导性表达CTLA-4分子,设计以anti-CTLA-4单链抗体(scFv)为导向片段、膜孔道形成分子-穿孔素(PFP)孔道形成功能域为杀伤片段的免疫毒素,以选择性清除活化的T细胞。抗CTLA-4抗体能选择性地与活化T细胞结合,膜孔道形成蛋白作为免疫毒素杀伤片段,克服了现有胞内作用杀伤片段毒副作用大、免疫原性强、分子内化效率低的缺点,成为更具优势的杀伤片段。
本研究以anti-CTLA-4单链抗体(scFv)为导向片段、穿孔素孔道形成功能域为杀伤片段构建了T细胞选择性杀伤分子hS83-P34,表达该蛋白,探索其功能。
以新鲜分离的外周血淋巴细胞、脐静脉细胞株ECV-304为阴性对照细胞,利用ConA活化T细胞、CTLA-4阳性细胞株CEM、Raji建立细胞模型,检测复性后可溶hS83-P34功能。以PBS为空白对照,hS83为阴性对照,MTS法测定hS83-P34作用后的活细胞量;空白对照组细胞存活率作为100%计算基准,分析hS83-P34对不同细胞存活率的影响。
同种异基因移植引起强烈的T细胞介导的急性排斥反应。本研究建立同种异基因移植排斥模型,观察hS83-P34抗移植排斥作用。
本论文的研究表明,成功构建、表达的活化T细胞选择性清除分子hS83-P34具有高特异性、高活性、低毒性、低免疫原性等特点,能清除活化T淋巴细胞延长移植物的存活,在移植排斥反应的防治中可能具有广阔的应用前景。
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