豌豆根瘤菌hurL基因对群体感应(quorum sensing)系统的影响及新基因px3的功能研究

来源 :中国科学院上海生物化学和细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:spirithero
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本实验室李强发现新基因hurL的突变造成豌豆根瘤菌(Rhizobium leguminosarum bv.Viciae)生长缺陷,而且丧失了在天然宿主上结瘤的能力。豌豆根瘤菌HurL蛋白与细菌HU类蛋白家族成员具有较高的同源性,它的功能是相当复杂,可能参与了一系列具有不同生理功能的基因的表达控制。通过SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色技术表明hur1突变株的蛋白表达谱与野生型菌株的蛋白表达谱有着相当大的差异。通过质谱技术对差异蛋白做鉴定,我们发现了两个属于群体感应系统的蛋白, RhiA和TrbB,它们在野生型菌株中表达丰富而在突变株中几乎没有表达。R.leguminosarum bv.vicfae,中已经发现了4个群体感应系统(rai,tra,cin和rhi),它们之间形成一个巨大的调控网络,rhiA和trbB属于rhi系统和tra系统。CV026显色实验结果表明hurL突变株完全不产生可被CV026检测的小分子化合物AHLs,表明raiI traI和rhiI三个群体感应系统都失去了功能。群体感应系统中相关基因启动子融合LacZ实验表明,hurL突变株中群体感应相关基因的表达远远低于野生型菌株。凝胶延滞实验进一步发现hurL突变株中缺少了多个本应存在于野生型中且可与群体感应系统相关基因启动子相结合的未知蛋白。本论文工作表明hurL基因对于维持群体感应系统相关基因的正常表达和相应AHLs小分子化合物的产生都是必不可少的。
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