黄瓜果实弯曲性蛋白质组学研究

被引量 : 15次 | 上传用户:wkan
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
黄瓜果形是衡量黄瓜品质的重要条件。在黄瓜栽培和育种工作中,有效减少弯曲果实的比率,培育果形顺直、整齐一致的品种尤为重要。黄瓜果实弯曲性是多基因控制的数量性状遗传。黄瓜果实弯曲性的基因加性效应较大,显性效应相对较小。显性×环境互作效应相对较高,加性×环境互作效应很小。为了能从遗传育种角度对黄瓜果实弯曲特性进行研究,实现对果实弯曲的调控和改良,有必要对黄瓜果实弯曲性的分子机理进行研究。果实弯曲形成过程中,会存在一系列的细胞调控机制,必然涉及到多个蛋白质,果实发生弯曲后,会通过改变体内蛋白质的表达和酶类的活性等来完成信号的感应、传递以及生物学效应的实现。因此,要对生命的复杂活动有全面和深入的认识,必然要在整体、动态、网络的水平上对蛋白质进行研究,有助于在蛋白质水平上全面系统认识弯曲果实的变化特征和细胞代谢等过程。将其与基因组学、转录组学、代谢组学整合,能够实现对体系内代谢调控的动态监测,揭示细胞生理状态的进程与本质、对弯曲发生的反应途径以及细胞调控机制,对我们从整体上系统地解析黄瓜果实弯曲形成和调控的复杂机理具有重要意义。本研究利用双向凝胶电泳和质谱分析技术,研究开花座果期、果实膨大期和商品成熟期黄瓜顺直果实、弯曲果实腹部和脊部蛋白质组的变化,获得黄瓜弯曲特性相关差异蛋白,利用生物信息学方法对差异蛋白质的生物学功能、参与生物过程、调控机制、蛋白质间的相互作用、染色体定位信息等进行分析,利用实时定量PCR技术对顺直果实、弯曲果实腹部和脊部的基因表达量变化进行验证,寻找调控黄瓜果实弯曲的关键基因,探索黄瓜果实弯曲形成的分子机理以及相关调控机制。主要研究结果如下:1)采用双向凝胶电泳技术(2-DE)对黄瓜顺直果实、弯曲果实腹部和弯曲果实脊部样品进行黄瓜果实弯曲特性差异蛋白质组学研究,分别在开花座果期、果实膨大期和商品成熟期鉴定到2114、1929和2638种差异蛋白质;利用2-sample t-test和fold change方法筛选差异表达蛋白质。利用质谱分析技术对差异蛋白质进行鉴定,分别获得开花座果期、果实膨大期和商品成熟期表达量符合上调2倍以上、有99%统计学显著性(P <0.05)的差异表达蛋白质11、7和43个。2)鉴定蛋白质多数为弯曲果实和顺直果实间差异表达蛋白质,少数为弯曲果实腹部和脊部间差异表达蛋白质。与顺直果实相比,开花座果期、果实膨大期和商品成熟期在弯曲果实腹部下调两倍表达、在弯曲果实脊部和顺直果实中无显著差异的差异蛋白质数分别为2、0和6个;在弯曲果实脊部下调两倍表达、在弯曲果实腹部和顺直果实中无显著差异的差异蛋白质均为1个;与顺直果实相比,在弯曲果实腹部与脊部均上调表达、而腹部和脊部之间没有显著差异的蛋白质数分别为3、4和19个,在弯曲果实腹部与脊部均下调表达、且在腹部和脊部无显著差异的差异蛋白质数分别为5、2和14个。3)鉴定的差异蛋白质分为22个功能类别,包括氧化还原、蛋白质水解、转运、新陈代谢过程、细胞蛋白质代谢、细胞周期、光合作用、逆境胁迫、核黄素合成、细胞骨架组成与发生、氮代谢、脂类代谢、核苷酸代谢、mRNA代谢、生物节律、蛋白酶体调节、生物过程、DNA损伤应激反应、DNA复制调节、复制后修复、翻译延伸以及未获得分类蛋白。其中,与黄瓜果实弯曲性相关的差异蛋白质功能主要集中在氧化还原过程,此外,转运、细胞周期、光合作用和蛋白质水解等功能蛋白质也发挥重要作用。4)对开花座果期、果实膨大期和商品成熟期的差异蛋白质进行层次聚类分析,主要分为两个大类,分别包括20和41个差异蛋白质。第一类(HZ9412-HK4319)多在果实发育初期表达量低,而在果实发育中后期表达量高;第二类(HZ7802-HZ1314)多在果实发育初期或中期表达量高,在果实发育中后期表达量高。根据差异蛋白质的表达情况,顺直果实和弯曲果实腹部和脊部被聚类为两组,一组为果实膨大期弯曲果实腹部和脊部、商品成熟期弯曲果实腹部和脊部;另一组包括开花座果期顺直果实、弯曲果实腹部和脊部,果实膨大期顺直果实,商品成熟期顺直果实,不同时期蛋白质表达量的差异远大于相同时期不同部位的蛋白质表达量差异。5)60个差异蛋白质序列分别成功定位在黄瓜7条染色体上,第6和第4条染色体上最多,分别为13个和11个,第2条染色体上最少,只有5个。同时包含三个时期差异表达蛋白质信息的染色体为第1、第3和第6染色体。除第7染色体以外,其他6条染色体上均存在参与氧化还原过程相关差异蛋白序列信息分布比较均匀,最多为3个,最少为1个。参与转运过程的蛋白质序列主要定位在第5染色体上,少数在第7染色体上。参与蛋白质水解的差异蛋白质序列信息主要定位于第4染色体。参与光合作用蛋白序列信息主要定位于第6染色体。6)利用KEGG数据库信息和KO分类体系分析差异蛋白质所在的生物学通路及相互关系,共找到39个相关的pathway,其中氧化磷酸化,光合作用,乙醛酸二羧酸代谢,细胞周期,卵母细胞减数分裂等pathway呈现蛋白质富集,对黄瓜果实弯曲进行调控。7)对分别参与氧化还原过程、转运过程、核黄素代谢、脂代谢和氮代谢过程的8个差异蛋白质在mRNA水平进行验证,转录水平与蛋白质水平表达趋势一致的蛋白为验证蛋白总数的62.5%。其中,蛋白点HP8012、HZ5012、HZ5615、HZ7601和HZ1302的表达变化与在mRNA水平的表达具有相似性。蛋白点HZ7629和HZ4803表达变化呈相反趋势。蛋白点HP4412在蛋白质水平表现为顺直果实中上调,但在mRNA水平弯曲果实腹部、脊部和顺直果实的表达量没有显著差异。
其他文献
本研究以乳蛋白合成的信号通路为切入点,选择乳蛋白基因表达必不可少的JAK-STAT5信号通路中的STAT5信号分子,与乳蛋白翻译合成密切相关的PI3K-AKT-mTOR信号通路中的AKT1和mTOR
认知心理学的学习观认为,学习是以人的整体心理活动为基础,并利用个体内部的认知因素和情意因素,积极反应外部刺激的过程。因此,本文将从认知心理学中学习的四项基本要素即认
<正>3D打印技术正悄然席卷全球,并依靠其突出优势迅速占领了部分市场,成为工业制造的新宠。如何将3D打印更好地融入我国的现代化工业生产中已然成为热门话题,而对于我国已经
中医升降学说是中国传统医学的瑰宝,对于认识和了解人体生理、病理以及指导临床疾病的治疗有着重要的意义。文章通过梳理古代医籍中各医家学派对中医升降学说的独到的认识和
中国是个发展中的农业大国,三农问题由来以久,只有解决好“三农”问题,才能更好地推动我国的工业化与现代化进程,促进我国经济社会全面、协调、可持续发展。三农问题的首要问
目的:制订用于冠心病心绞痛证候要素研究的中医临床信息采集表,并通过评分者信度分析方法进行评价,以期制订一个可靠有效的临床信息采集表。方法:采用由两名经过培训的研究生
目的了解慢性乙型肝炎患者的睡眠质量及干扰因素、其睡眠质量与焦虑及抑郁程度有无相关性,并研究三种干预方法改善伴有睡眠障碍的慢性乙型肝炎患者睡眠质量的临床效果,以期为临
随着育种技术的不断发展,以及科研院校、种子企业等单位育种工作力度的加大,农作物新品种如雨后春笋般层出不穷,特别是水稻新品种(新组合)更是丰富多彩。大量新品种为广大农民提供
应用透射电子显微镜观察0(对照),3,9g/L盐胁迫4个月下美国白蜡和滨梅根系细胞超微结构的变化。结果表明:低盐(3g/L)胁迫下,美国白蜡根系细胞质凝聚,质壁分离明显,细胞器降解严重,细胞核核
<正>11月17日,中国国家主席习近平与澳大利亚总理阿博特在澳大利亚首都堪培拉举行会谈,双方共同确认实质性结束中澳自由贸易协定谈判。中澳自由贸易协定谈判于2005年4月启动,