论文部分内容阅读
目的 构建干扰非小细胞肺癌A549细胞表皮生长因子受体表达的四种质粒，通过抑制表皮生长因子受体在非小细胞肺癌细胞株内的表达，观察RNA干扰技术抑制肿瘤细胞生长以及对表皮生长因子受体表达的抑制率，探索肺癌等恶性肿瘤治疗的新途径。
方法 1．根据RNA干扰的原理，构建针对人类表皮生长因子受体的四种质粒pSilencer-EGFR Ⅰ、pSilencer-EGFR Ⅱ、pSilencer-EGFRⅢ和 pSilencer-EGFRⅣ；2．将构建的四种质粒pSilencer-EGFR Ⅰ、pSilencer-EGFR Ⅱ、psilencer-EGFRⅢ、pSilencer-EGFRIV以及psilencer-control分别转染非小细胞肺癌A549细胞，用Hygromycin B筛选得到转染成功的细胞克隆；3．采用MTT法检测抑制A549细胞增殖率；4．采用RT—PCR检测表皮生长因子受体mRNA表达的抑制率。
结果1．成功构建了针对表皮生长因子受体的四种质粒pSilencer-EGFR Ⅰ、pSilencer-EGFR Ⅱ、pSi lencer-EGFRⅢ和 psilencer-EGFRIV；2．成功转染A549细胞，经筛选后得到稳定表达的细胞克隆； 3．RT—PCR和MTT检测的结果表明，质粒对表皮生长因子受体mRNA的抑制率达71.2％，细胞增殖抑制率达88.85％。
结论 结果表明RNA干扰技术能有效降解靶基因的mRNA，通过对表皮生长因子受体mRNA的抑制能有效抑制细胞的增殖。