20-羟二十烷四稀酸(20-HETE)经NADPH氧化酶衍生的活性氧途径引起乳鼠心肌细胞钙超载效应

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抑制细胞色素P-450(CYP450)ω-羟化酶作用20-羟二十烷四烯酸(20-hydroxyeicosatetraenoic,20-HETE)产生降低,明显抑制心肌梗死面积。但是20-HETE对心肌细胞的作用还不清楚。因此,本研究旨在研究20-HETE对细胞内钙离子水平和活性氧( ROS)的影响。利用钙离子荧光探针Fluo-3染色,运用激光共聚焦显微镜检测20-HETE对培养大鼠乳鼠心肌细胞内钙离子浓度及钙瞬变的影响;ROS荧光探针DHE可穿透细胞,检测胞内ROS,Image ProPlus软件测定药物处理前后荧光强度的变化;运用光泽精化学发光法测定NADPH氧化酶活性。20-HETE(0.1umol/L)孵育,可以使胞内钙离子浓度由531±35.0增加到942±47.2,升高44%,且钙瞬变的幅度由2.8±0.24增加到4.2±0.27升高33%,20-HETE造成的细胞内钙离子超载的作用可明显被ROS清除剂tempol(100 u M)和NADPH氧化酶抑制剂加拿大麻素(apoeynin,1uM)阻断。20-HETE(O.1 u M)可致心肌细胞内超氧化物阴离子从31±1.2增加到40±1.7升高23%,同时使NADPH氧化酶活性由152972±11354.5增加到209932±17738.5增加27%。上述研究表明20-HETE引起心肌细胞钙超载:20-HETE激活NADPH氧化酶导致胞内ROS水平上调,造成心肌细胞钙超载。20-HETE可能与心肌缺血造成的心肌损伤有关。
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