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Ⅰ群禽腺病毒(Fowl adenovirus groupⅠ，FAdV-Ⅰ)为无囊膜，球形的双链DNA病毒，具有共同的群抗原，属于腺病毒科禽腺病毒属。病毒广泛存在多种家禽消化道和呼吸道内，大多数不使家禽发病呈隐性感染，或与其他病原共同作用，导致家禽大量发病或死亡。根据限制性酶切图谱以及血清交叉中和反应性，可将现有的Ⅰ群禽腺病毒分为5个基因型(A～E)，12个血清型(1～12)。流行病学研究发现，禽腺病毒在世界范围内广泛分布，且对不同日龄的家禽均表现为易感，是鸡、鸭、鹅等禽类常见的传染病之一。自2013年，国内出现了一种引起禽包涵体肝炎(Inclusion body hepatitis in chicken，IBH)和心包炎综合征(Hydropericardium syndrome，HPS)的高致病性禽腺病毒(Fowl adenovirus，FAdV)，到2015年6月，该病已在全国大范围流行，多呈急性发病，发生于20～30日龄肉鸡、肉鸭等，病程8～15天，发病后第4～8天为死亡高峰期，死亡率在20％～80％，给养禽业造成严重的经济损失。2016年，我们证实该疫情主要为一种Ⅰ群禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype4，FAdV-4)流行株引起，为了便于该病的临床感染监测，研制有效的抗体免疫检测方法具有重要的作用。 六邻体(Hexon)蛋白是血清4型禽腺病毒中含量最高的主要结构蛋白，大约占总蛋白含量的90％左右，它与纤突(Fiber)蛋白和五邻体(Penton)蛋白共同组成血清4型禽腺病毒的核衣壳，决定了病毒粒子的大小。Hexon蛋白具有型、群和亚群特异抗原决定簇，是中和抗体的靶标之一，作为诊断抗原具有良好的应用前景，我们通过对Hexon单克隆抗体制备，为血清4型禽腺病毒诊断和免疫学检测提供工具。 本研究通过参考GenBank中血清4型禽腺病毒流行株JS7hexon基因序列，对Hexon氨基酸的抗原性和亲水性分析，我们选取N端1～293位氨基酸作为多肽表位候选区域，利用PCR方法扩增出目的片段，并将其克隆入原核表达质粒pET-30a中，构建重组质粒pET-30a-hexon。并将原核表达质粒转化到感受态细菌BL21(DE3)中，经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达，表达产物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳进行分离与鉴定，并将原核表达产物30a-Hexon蛋白注射到Balb/c小鼠腹腔，三次免疫后，取免疫小鼠血液，分离出其血清。用真核表达载体pcDNA3-hexon转染293T细胞作为抗原，经间接免疫荧光(IFA)方法检测为阳性后，取阳性小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0在PEG4000作用下进行融合，并利用有限稀释法和IFA筛选Hexon单抗杂交瘤细胞。 通过本次实验，我们成功筛选出2株具有较好的IFA、ELISA和Western Blot免疫原性的Hexon单抗杂交瘤细胞，即1B4和3G8。它们的效价较高，特异性较强，检测两株单抗亚型均为IgG1和κ，初步确定其抗原表位识别区域均在181PNPNQGPGRNPLRRVQNANTGVLGRFAKSQYNYAYGAYVK219之间。为进一步研究血清4型禽腺病毒的分子生物学特性及Hexon蛋白结构与功能奠定了基础，同时也为血清4型禽腺病毒诊断试剂盒的研发提供了技术支撑。