抗β淀粉样蛋白诱导细胞凋亡作用的天然药物单体筛选及其作用机制的实验研究

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目的筛选具有抑制Aβ促细胞凋亡毒性作用的天然药物单体,同时对其抗Aβ促细胞凋亡的作用机制进行初步探讨。 材料与方法通过Aβ25-35多肽诱导神经母细胞瘤细胞凋亡,以及利用凋亡诱导剂丁酸钠诱导M146L突变早老素1(PS1)基因与野生型淀粉样蛋白APP761双转染中国仓鼠卵巢瘤细胞凋亡两种Aβ促细胞凋亡模型,采用MTT、流式细胞仪、细胞免疫化学、Westernblot免疫印迹、RT-PCR等实验技术和方法对人参皂甙Rb1、Rg1和天麻素等七种天然药物单体的抗Aβ促细胞凋亡作用进行观察,同时从Aβ生成途径和凋亡效应蛋白两个方面探讨天然药物单体抑制Aβ促细胞凋亡的作用机制。 结果通过MTT、流式细胞仪检测发现人参皂甙Rb1、Rg1、天麻素和川芎嗪四种天然药物单体,对Aβ促细胞凋亡有抑制作用。细胞免疫化学、Westernblot免疫印迹结果中人参皂甙Rb1、Rg1和天麻素对Aβ42蛋白表达有抑制作用,人参皂甙Rb1、Rg1和川芎嗪对caspase3活性片段表达有抑制作用。人参皂甙Rb1、Rg1、天麻素、川芎嗪均有不同程度提高α分泌酶活性作用。Westernblot免疫印迹、RT-PCR实验方法显示人参皂甙Rb1、Rg1、天麻素、川芎嗪对β分泌酶BACE1基因表达无影响,其中人参皂甙Rb1、Rg1对α分泌酶中ADAM9、ADAM10基因mRNA和蛋白表达均有抑制作用。 结论人参皂甙Rb1、Rg1和天麻素三种天然药物单体可通过上调α分泌酶中ADAM9、ADAM10基因表达,增加α分泌酶活性来间接抑制Aβ42产生,同时也可通过不同程度降低凋亡效应蛋白caspase3活性的双重生物学机制发挥抗Aβ促细胞凋亡的毒性作用。
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