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目的筛选具有抑制Aβ促细胞凋亡毒性作用的天然药物单体,同时对其抗Aβ促细胞凋亡的作用机制进行初步探讨。
材料与方法通过Aβ25-35多肽诱导神经母细胞瘤细胞凋亡,以及利用凋亡诱导剂丁酸钠诱导M146L突变早老素1(PS1)基因与野生型淀粉样蛋白APP761双转染中国仓鼠卵巢瘤细胞凋亡两种Aβ促细胞凋亡模型,采用MTT、流式细胞仪、细胞免疫化学、Westernblot免疫印迹、RT-PCR等实验技术和方法对人参皂甙Rb1、Rg1和天麻素等七种天然药物单体的抗Aβ促细胞凋亡作用进行观察,同时从Aβ生成途径和凋亡效应蛋白两个方面探讨天然药物单体抑制Aβ促细胞凋亡的作用机制。
结果通过MTT、流式细胞仪检测发现人参皂甙Rb1、Rg1、天麻素和川芎嗪四种天然药物单体,对Aβ促细胞凋亡有抑制作用。细胞免疫化学、Westernblot免疫印迹结果中人参皂甙Rb1、Rg1和天麻素对Aβ42蛋白表达有抑制作用,人参皂甙Rb1、Rg1和川芎嗪对caspase3活性片段表达有抑制作用。人参皂甙Rb1、Rg1、天麻素、川芎嗪均有不同程度提高α分泌酶活性作用。Westernblot免疫印迹、RT-PCR实验方法显示人参皂甙Rb1、Rg1、天麻素、川芎嗪对β分泌酶BACE1基因表达无影响,其中人参皂甙Rb1、Rg1对α分泌酶中ADAM9、ADAM10基因mRNA和蛋白表达均有抑制作用。
结论人参皂甙Rb1、Rg1和天麻素三种天然药物单体可通过上调α分泌酶中ADAM9、ADAM10基因表达,增加α分泌酶活性来间接抑制Aβ42产生,同时也可通过不同程度降低凋亡效应蛋白caspase3活性的双重生物学机制发挥抗Aβ促细胞凋亡的毒性作用。