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本研究以“神湾”菠萝为材料,着重研究了菠萝受体系统的建立,并初步研究了农杆菌介导的菠萝遗传转化。主要研究如下:
1.菠萝受体系统的建立:以带叶鞘的茎段为外植体,采用“2﹪NaClO10min-0.1﹪升汞8min-0.1﹪升汞5min”法进行消毒,将无菌材料接种在MS+BA5.0mg/L+NAA2.5mg/L。采用正交实验研究了生长调节剂BA、NAA、2,4-D的不同浓度及配比对愈伤组织增殖的影响。采用正交试验研究了生长调节剂BA、NAA的不同浓度对不定芽再生的影响。不定芽的生根试验结果表明培养基中添加BA不利于菠萝的生根。
2.菠萝转化的初步研究:菠萝对Km比较敏感,分化培养基中添加20mg/L的Km就能使分化的不定芽全部白化。愈伤组织预培养2d,用OD600约为0.5的根癌农杆菌(内含具CYP1A1基因的植物转化质粒)菌液浸染5min,在添加有AS100μmol/L的再生培养基上黑暗培养3d,再转入含有Km20mg/L、Carb400mg/L的再生培养基上进行三次筛选培养,每3周继代一次,淘汰白化芽,选留绿芽,连续筛选三代后将绿芽培养于不含抗生素的生根培养基。