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目的:本实验的主旨在于通过动物实验探讨芹菜素(Api)及肿瘤坏死因子(TNF-α)在生殖轴调控中的作用及作用部位。
方法:通过阴道涂片选用处于情前期成年雌性S-D大鼠44只，取下丘脑、腺垂体及卵巢分别进行原代细胞培养，贴壁后，于腺垂体及卵巢培养液中分别加入不同浓度的Api(10-4M、10-5M、10-6M)及TNF-α(100ng/ml)，孵育24h后，每24h取卵巢及腺垂体培养液各2ml，再进行顺序灌流共5次，将培养液冷冻干燥后按放免试剂盒说明测FSH、LH、E2及P，并收集各组培养卵巢颗粒细胞，用流式细胞仪检测颗粒细胞凋亡率。同时各组颗粒细胞分别做MTT检测、HE染色及丫啶橙染色，观察Api与TNF-α对卵巢颗粒细胞增殖的作用及形态学的的影响。
结果:1.Api及TNF-α对生殖激素分泌的调节作用实验中发现Api(10-4M-10-6M)以浓度依赖方式使原代培养的雌性情前期大鼠卵巢细胞E2及P的分泌量明显减少，与对照组比较，差异极显著P＜0.01，且随着Api浓度的增加，E2及P的含量亦呈减少趋势。TNF-α(100ng/ml)也明显抑制E2及P的分泌量。但Api为10-4M时与TNF-α(100ng/ml)相比，E2的含量明显减少，差异极显著P＜0.01，而Api为10-5M时培养后第一天及第三天与TNF-α相比E2的含量差异显著P＜0.05，Api为10-6M与TNF-α相比无显著性差异。从Api与TNF-α对P的含量影响来看，Api的作用不如TNF-α。从实验中可以看出Api(10-4M-10-6M)对原代培养的雌性动情前期大鼠腺垂体细胞LH、FSH的分泌量与对照组比较无明显减少，而TNF-α组与对照组比较明显减少，差异极显著。
2.Api及TNF-α对原代培养雌性大鼠卵巢颗粒细胞的作用2.1形态学观察：对照组颗粒细胞脏染色可见颗粒细胞大小规则。Api为10-4M组颗粒细胞HE染色可见颗粒细胞数量减少，体积缩小，胞浆凝缩。AO染色后在荧光显微镜下观察可见颗粒细胞中出现凋亡细胞。2.2MTT检测及FCM检测结果：实验结果显示，OD值与颗粒细胞凋亡率之间的变化趋势是相同的。其中第3、5、7、11组OD值与颗粒细胞凋亡率分别为0.29±0.057、0.49±0.03、0.63±0.035、0.19±0.035及36.37％±2.28％、34.67％±1.90％、30.92％±1.65％、37.84％±3.84％与对照组0.87±0.059、2.63％±0.37％相比有极显著性差异(P＜0.01)，第2、4、6、10组与对照组相比有显著性差异(P＜0.05)。说明Api及TNF-α能够抑制颗粒细胞增殖，并促进其凋亡。
结论:Api在卵巢水平上抑制E2及P的合成，并抑制颗粒细胞的增殖，促进其凋亡。TNF-α在腺垂体及卵巢水平上同时发挥作用，抑制FSH、LH、E2、P的合成，同时抑制颗粒细胞的增殖，促进其凋亡。Api抑制E2的作用大于TNF-α，而TNF-α抑制P的作用强于Api，提示二者作用机制是不同的。