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基因组印记(genomic impring)是等位基因依赖双亲性别表达的不符合孟德尔遗传定律的特殊遗传现象。目前已知的大多数印记基因都是生长发育和分化的有关基因。由于印记基因是父源或母源等位基因表达,基因表达产物量在影响该基因生长发育和分化等功能方面有重要意义。本研究主要对在生长发育方面各具特色的蓝塘猪和长白猪的各印记基因(IGF2、H19、DLK1)表达量与生长性状进行了比较研究。在1、180日龄进行生长性能测定、屠宰和样品采集(其中1日龄长白、蓝塘各6头,180日龄长白、蓝塘各6头,在6头180日龄的长白/蓝塘猪中3头阉割公猪,3头母猪)。本研究运用RT-PCR、实时荧光定量PCR等技术对猪的印记基因IGF2、H19、DLK1 mRNA的表达量与生长性状之间的关系进行了研究。主要包括印记基因DLK1的多态性与背膘厚等主要生长性状的关系,主要不同生长性状的指标下各印记基因mRNA水平表达差异,试图从基因转录水平寻找一些该基因在猪上的作用机理,为猪繁殖性状的研究提供一些有益的帮助。主要的研究结果如下:
1.用SYBR Green I实时荧光定量PCR技术检测父方表达印记基因IGF2在长白和蓝塘猪肌肉、肝脏、胃组织、脂肪组织表达差异分析,结果表明:(1)长白仔猪肝脏mRNA表达量以1日龄重、肝重、胸围宽以及胴体重分组,组间差异显著(p<0.05),重组显著高于轻组,宽组显著高于窄组。(2)蓝塘仔猪肝脏mRNA表达量以出生重分组,组间差异显著(p<0.05),重组显著高于轻组。(3)180日龄长白猪肝脏mRNA的表达量以公母分组,组间差异显著(P<0.05),阉公猪肝脏表达量显著高于母猪。以其他生长性状分组各组织之间的表达量差异不显著(P>0.05)。(4)180日龄蓝塘肝脏组织的IGF2 mRNA表达量以公母以及皮脂厚度分组,表达量差异显著(P<0.05),阉公猪肝脏表达量显著高于母猪的肝脏表达量,皮脂肪厚组猪的肝脏组织中IGF2 mRNA表达量显著高于皮脂肪薄组;肌肉组织的IGF2 mRNA表达量以胸围宽度分组,组间差异显著(P<0.05),胸围宽组显著高于窄组;以背膘厚和胴体重分组,脂肪组织中IGF2 mRNA表达量差异显著(P<0.05),背膘厚组显著高于背膘薄组,胴体重组显著高于轻组。以其他生长性状分组各组织之间的表达量差异不显著(P>0.05)。(5)1日龄的长白和蓝塘的肌肉和肝脏组织中IGF2 mRNA的表达量相比180日龄的组间差异显著(P<0.05),无论是长白还是蓝塘猪,1日龄的肌肉、肝脏组织中IGF2 mRNA的表达量显著高于180日龄肌肉、肝脏组织中的表达量。胃组织之间表达量差异不显著(P>0.05)。(6)1日龄长白与蓝塘的肝脏组织中IGF2 mRNA的表达量差异显著(P<0.05),蓝塘的肝脏组织中IGF2 mRNA的表达量显著高于长白肝脏组织中IGF2 mRNA的表达量。肌肉、胃组织中IGF2 mRNA的表达量差异不显著。180日龄长白与蓝塘的胃组织中IGF2 mRNA的表达量差异显著(P<0.05),长白胃组织中IGF2 mRNA的表达量显著高于蓝塘胃组织中IGF2 mRNA的表达量。肌肉、肝脏、脂肪组织中IGF2 mRNA的表达量差异不显著。(7)IGF2在1日龄的长白和蓝塘猪各组织中均表达,其中肌肉、肝脏组织表达量较之其他测定组织(胃、肠道、肾脏、心脏、膀胱)明显较高,在180日龄的长白和蓝塘猪的各组织中IGF2表达量比较平均,且较之1日龄时肌肉、肝脏中表达量显著降低。
2.用SYBR Green I实时荧光定量PCR技术检测母方表达印记基因H19在长白和蓝塘猪肌肉、肝脏、胃组织、脂肪组织中表达差异分析,结果表明(1)1日龄长白、蓝塘以各性状分组各组间表达差异均不显著(P>0.05)。(2)180日龄长白猪肝脏中mRNA表达量皮脂薄组显著高于皮脂厚(P<0.05),后躯轻组显著高于后躯重组(P<0.05)。以其他性状分组组间均差异不显著(P>0.05)。(3)1日龄长白猪胃组织中H19 mRNA的表达量显著高于180日龄胃组织中H19mRNA的表达量,肌肉、肝脏组织之间差异不显著(P>0.05)。(4)1日龄长白与蓝塘的肝脏、肌肉、胃组织中H19 mRNA的表达量差异不显著(P>0.05);180日龄长白与蓝塘肌肉组织中H19 mRNA的表达量差异显著(P<0.05),蓝塘肌肉组织中H19 mRNA的表达量显著高于长白肌肉组织中H19 mRNA的表达量。肝脏、胃组织中H19 tuRNA的表达量差异不显著(P>0.05)。(5)H19 mRNA在1日龄的长白和蓝塘猪各组织中,胃组织中表达量最高,其他组织(肌肉、肝脏、肠道、肾脏、心脏、膀胱)中的表达量较低:在180日龄的长白猪各组织中H19 mRNA表达量较为平均,胃组织中最高,180日龄的蓝塘猪各组中除肾脏组织H19mRNA表达量较高外,其他各组织(肌肉、肝脏、肠道、胃、心脏、膀胱)中表达量较平均。
3.用SYBR Green I实时荧光定量PCR技术检测父方表达印记基因DLK1在在长白和蓝塘猪肌肉、肝脏、胃组织、脂肪组织中表达差异分析,结果表明:(1)按照各性状分组组间差异均不显著(P>0.05)。(2)DLK1基因mRNA的表达量无论是在长白还是蓝塘猪,1日龄的肌肉、胃组织中的表达量与180日龄的肌肉、胃组织相比组间差异显著(P<0.05)。(3)1日龄和180日龄长白与蓝塘猪肌肉组织中DLK1 mRNA表达量差异显著(P<0.05),1日龄时,蓝塘肌肉组织中DLK1mRNA表达量显著高于长白肌肉组织中DLK1 mRNA表达量,180日龄时长白肌肉组织中DLK1 mRNA表达量显著高于蓝塘肌肉组织中DLK1 mRNA表达量。肝脏、胃和脂肪组织中DLK1 mRNA表达量差异不显著(P>0.05)。(4)DLK1mRNA在1日龄的长白和蓝塘猪肌肉组织中表达量最高,肝脏组织中表达量最低,其他组织(肌肉、肾脏、肠道、肾脏、心脏、膀胱)表达量比较平均,都比较低;180日龄的长白蓝塘猪肌肉组织中DLK1 mRNA表达量显著降低,其他各组(胃、肝脏、肠道、肾脏、心脏、膀胱)中DLK1 mRNA表达量较之1日龄时DLK1 mRNA表达量波动不大。