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成鸭蛋清因含有高浓度的食盐和具有异味而常被废弃,这不仅浪费了资源,又污染了环境,本论文对咸鸭蛋清的资源化进行了研究,从中依次制备上清蛋白及其水解物、溶菌酶和抗生物素蛋白等产品。
本文利用生物素化的过氧化物酶并偶联其显色反应,建立了一种简便的抗生物素蛋白含量测定新方法。进而对咸鸭蛋清中的蛋白、溶菌酶和抗生物素蛋白等含量进行了普查,结果显示:咸鸭蛋清的蛋白含量为115±15g/Kg,溶菌酶为50404±386U/mL,抗生物素蛋白含量约为0.05%(w/w),是制备蛋白、溶菌酶和抗生物素蛋白潜在的资源。
对咸鸭蛋清上清蛋白的回收脱盐方法进行了研究,结果表明:经酸热变性处理后,蛋白回收率达66.1±5.3%,而溶菌酶和抗生物素在上清中的回收率则分别可达到70.1±5.5%和90.1±5.0%;酒精沉淀法的蛋白回收率可达91.7±5.0%,但上清中溶菌酶与抗生物素蛋白的回收率仅分别为11.2±6.2%,50.4±4.8%,综合考虑,选用酸热变性的蛋白回收方法。比较了四种蛋白酶对回收蛋白的水解效果,其中木瓜蛋白酶水解效果最好,反应4h后,水解度可达41.2%,酸性蛋白酶的水解度为20.4%,而胰蛋白酶和中性蛋白酶的水解度分别为15.8%和10.5%。亦对水解物的脱色做了初步研究。
采用亲和吸附法从酸热变性后的上清中分离纯化溶菌酶。先是采用脱氨再生几丁质进行溶菌酶的分离,经此步骤溶菌酶被纯化了12.7倍,活力回收为39.3%,纯化酶的比活力达77585.1U/mg蛋白质,经SDS-PAGE均显示单一蛋白染色带;由于所采用的原料中常混有泥沙、蛋壳和蛋壳膜碎片等杂质,且粘度较大,采用一般的亲和层析时易造成层析柱的堵塞,因此本实验又采用磁性亲和介质来提取咸鸭蛋清中的溶菌酶,而磁性亲和吸附法存在的问题是介质中的磁性颗粒对蛋白质的非特异性吸附和漏磁现象;因此本文又尝试将磁性颗粒的表面包被上一层惰性材料膜以消除这种非特异吸附和漏磁,结果表明:磁性微球经聚苯乙烯和SiO2包被后比较有效地克服了介质的漏磁问题,但对介质的非特异性吸附的改善并不明显。最后对纯化咸鸭蛋清溶菌酶的酶学特性进行了分析,结果表明:咸鸭蛋清溶菌酶在酸性条件下酶活性稳定,在碱性条件下酶活性容易丧失,其最适反应pH值为7.0。
本论文最后采用2-亚氨基生物素琼脂糖凝胶4B从酸热变性后咸鸭蛋清中亲和分离了抗生物素蛋白,回收率达60.1±5.0%,纯化倍数为9.04,纯化蛋白经SDS-PAGE电泳均显示单一蛋白染色带,其对应的分子量约为67.8K。本论文研究为咸鸭蛋清的综合资源化打下了坚实基础。