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表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)是一种跨膜酪氨酸激酶受体，属于HER受体家族。由三个结构域组成，即胞外配体结合域，跨膜域和胞内酪氨酸激酶域，在与配体结合后引起受体构象改变，从而引起下游一系列信号传导通路的活化。研究发现，许多实体瘤细胞膜表面都存在异常大量EGFR，受体的水平与肿瘤的分化程度、恶性程度、肿瘤的侵润及预后密切相关。近年来，靶向EGFR药物已成为肿瘤治疗的新热点。本文通过计算机模拟，将鼠－人嵌合抗体cetuximab的鼠源可变区的CDR及FR部分基因突变为人源序列，构建并表达7种抗EGFR人源化抗体。即以cetuximab为模板，设计合成轻链序列和重链可变区序列，拼接成完整的轻链和重链基因并克隆入pIRES双表达载体。瞬时转染293T细胞，用ELISA法初步检测培养上清中人源化抗体的表达水平；扩大转染体系，再用rProtein A柱进行亲和层析纯化抗体，并进行SDS-PAGE和免疫印记鉴定，ELISA和免疫印记结果显示均可表达相应抗体人；抗体在还原SDS-PAGE中表现为相对分子量约为25×103和50×103两条带。采用Biacore3000技术检测抗体结合抗原的能力，结果表明C3抗体与抗原具有良好的结合能力(亲和力为6.13×10-10M)。把表达载体转化至结直肠癌细胞SW480，用细胞侵袭实验初步检测抗体的功能，结果表明C2和C3抗体对肿瘤细胞生长迁移均具有一定的抑制作用。与国外市场上常见抗EGFR抗体相比，如FDA于2004年批准的人－鼠嵌合抗体Cetuximab(亲和力为1.1×10-9M)，2005年通过SFDA批准的抗EGFR人源化抗体Nimotuzumab(亲和力为4.5×10-8M)，本实验构建的人源化抗体C3能更好与EGFR结合，从而保证了其抗肿瘤效应。