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目的:通过观察TRPM8蛋白在福尔马林(Formalin)致急性直肠乙状结肠痛大鼠模型中背根神经节(DRG)的表达变化及鞘内注射TRPM8反义寡核苷酸后大鼠内脏痛行为学表现的变化,探讨TRPM8在直肠乙状结肠痛觉传递中的作用。
方法:(1)成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常组(Normal组)、生理盐水组(Saline组)和直肠乙状结肠痛组(Formalin组),观察三组大鼠内脏痛行为学评分,用免疫荧光标记及实时荧光定量PCR方法观察TRPM8在结肠支配节段DRG表达的改变。(2)成年雄性SD大鼠随机分为对照组(Control组),错义寡核苷酸组(MSOND组)和反义寡核苷酸组(ASOND组),鞘内分别注射同体积的生理盐水,TRPM8错义寡核苷酸与反义寡核苷酸,连续三天后制作急性直肠乙状结肠痛模型,观察动物行为学变化。
结果:(1)背根神经节(DRG)TRPM8的表达:①免疫荧光结果如下:正常组、生理盐水组和直肠乙状结肠痛组切片经免疫荧光染色后,在背根神经节感觉神经元中均出现TRPM8免疫阳性细胞,其强度由弱至强不等。②实时荧光定量PCR检测,记录TRPM8蛋白mRNA相对定量表达变化,结果如下:正常组(2-△△CT=8)与生理盐水组(2-△△CT=8)TRPM8 mRNA平均相对含量比值为1。正常组(2-△△CT=8)与直肠乙状结肠痛组(2-△△CT=2)TRPM8 mRNA平均相对含量比值为4。
(2)①正常组(0)与生理水组(12±11,20±13,8±8,2±1)内脏痛行为学评分无统计学差异(P＞0.05)。②直肠乙状结肠痛组(155±72,187±69,121±86,71±67)与生理盐水组(12±11,20±13,8±8,2±1)相比,内脏痛行为学评分增高,差异有统计学意义(P＜0.05)。③与对照组(118±28,171±72,87±37,50±31)相比,鞘内注射错义寡核苷酸大鼠内脏痛行为学评分(121±24,143±24,73±43,32±30)无统计学差异(P＞0.05)。④与对照组相比(118±28,171±72,87±37,50±31),鞘内注射TRPM8反义寡核苷酸大鼠内脏痛行为学评分(174±48,212±39,215±56,125±24)升高,差异有统计学意义(P＜0.05)。
结论:1.TRPM8蛋白在正常大鼠DRG有表达,急性直肠乙状结肠痛时DRG免疫荧光阳性神经元数量减少,与实时荧光定量PCR检测TRPM8 mRNA结果一致,提示:DRG可能部分参与Formalin所致急性直肠乙状结肠痛觉信息传递。
2.鞘内给予TRPM8反义寡核苷酸,TRPM8在DRG的表达减少,与对照组相比,大鼠对Formalin所致急性直肠乙状结肠痛行为学评分增加,进一步证实TRPM8蛋白可能不参与在Formalin所致急性直肠乙状结肠痛觉传递过程而在直肠乙状结肠其他感觉传递过程中发挥主要作用。