论文部分内容阅读
目的:分析江淮地区间日疟原虫乳酸脱氢酶基因(Plasmodium vivax lactate dehydrogenase. PvLDH)序列特征,以及是否存在多态性,研究其作为靶抗原在疟疾诊断和新药筛选中的意义及应用前景。方法:1、在安徽省蚌埠市区、五河县、利辛县等地采集间日疟患者末梢血,制备厚薄血片及干血滤纸片。用QIAamp DNA mini kit(QIAGEN,德国)试剂盒提取干血滤纸片间日疟原虫基因组DNA(gDNA)39份,所有样本经染色镜检和PCR检测鉴定均为单纯间日疟原虫。2、根据GenBank数据库中间日疟原虫Belem株LDH基因序列(NCBI No:DQ060151)设计引物,以提取的间日疟原虫基因组DNA为模板,PCR扩增LDH基因,产物经琼脂糖凝胶电泳纯化回收后连接至pGEM-T质粒,转化E.coli DH5α菌株后挑取菌落进行PCR鉴定,将初步筛选的阳性克隆进行测序,最后通过Blast等方法进行序列的比对分析。结果:39份患者血样经病原学染色镜检和PCR检测均为单纯间日疟原虫感染,未发现恶性疟原虫等其他疟原虫的单纯或合并感染。扩增的PvLDH编码基因克隆至T载体后测序显示目的片段大小均为951bp,且39份样本PvLDH核苷酸序列均无差异。通过BLAST方法对克隆的PvLDH基因序列进行比对分析,发现江淮地区间日疟原虫与Sal-I株、Belem株、萨尔瓦多株、EJEU60134株、MIMO612514株、ASAO6G29643株、ASAO6R09632株、MIAO61042株的LDH基因同源性高达99.7%-99.9%,只有1-3个碱基的差别;对PvLDH的氨基酸序列进行比对分析,结果发现江淮地区间日疟原虫与Sal-I株、Belem株等株间日疟原虫的LDH蛋白序列同源性为100%,与EJEU60134株、MIAO61251株的同源性为为99.7%,仅有1个氨基酸的差异。结论:江淮地区间日疟原虫乳酸脱氢酶基因序列具有高度保守性,与Sal-I株、Belem株等基因序列比对分析LDH基因同源性达99.7%-99.9%,氨基酸序列比对分析基本为同义突变,仅与EJEU60134株和MIAO61251株有一个氨基酸的变化,该研究为间日疟原虫诊断试剂的研制提供了的一定的理论依据。