论文部分内容阅读
背景信息少突胶质细胞瘤(oligodendroglioma)是胶质瘤的一种独立类型，与混合型少突胶质细胞瘤(mixedoligoastroglioma)一起统称为少突胶质细胞肿瘤(oligodendroglialtumor)。以往少突胶质细胞瘤的治疗方法与其他胶质瘤基本一致，主要是手术辅以放射治疗。1988年，Cairncross等[1]发现PCV[甲苄肼(procarbazine)、环己亚硝脲(CCNU)和长春新碱(vincristine)]联合化疗方案对部分复发性间变型少突胶质细胞瘤(anaplasticoligodendroglioma)有较好的治疗效果。其他研究机构的回顾性研究结果与Cairncross等人的发现基本一致[2,3]。少突胶质细胞瘤是第一个对PCV化疗药物敏感而且患者生存期明显延长的恶性胶质瘤。1994年，Reinfenberger等[4]发现少突胶质细胞瘤大多数发生1号染色体短臂(1p)和19号染色体长臂(19q)杂合性缺失(lossofheterozygosity,LOH)，而弥漫型星形细胞瘤(diffuseastrocytoma)很少发生这种遗传学改变。1998年，Cairncross等[5]发现少突胶质细胞瘤中染色体1p/19q的LOH与化疗的敏感性和较长的生存期密切相关。以后的研究发现含有少突胶质细胞瘤成份的少突星形细胞瘤(astrocytoma)和胶质母细胞瘤(glioblastoma)也部分有这种分子遗传学改变和相似的临床特征[6]。这说明检测染色体1p/19qLOH在少突胶质细胞肿瘤的诊断、指导临床治疗和判断预后中有着重要的意义。少突胶质细胞肿瘤的这些分子遗传学改变和临床特征使得病理医师诊断少突胶质细胞肿瘤的比率有所上升。而事实上，一些形态上和少突胶质细胞瘤相似的肿瘤如原浆型星形细胞瘤、胚胎发育不良性神经上皮瘤(dysembryoplasticneuroepithelialtumor)和中枢神经细胞瘤(centralneurocytoma)并不存在染色体lp/19qLOH[7]，治疗方案和预后也与少突胶质细胞肿瘤不同。这些患者有的对化疗不敏感，有的不需要术后辅助化疗，如果对这些患者贸然使用PCV化疗方案必然导致治疗不当。因此神经病理医生寻找少突胶质细胞肿瘤更特异的形态学指标、准确诊断就显得尤为重要。许多研究者都建议将少突胶质细胞肿瘤染色体1p/19qLOH检测作为少突胶质细胞肿瘤诊断的相对客观标准纳入常规检查，以降低少突胶质细胞肿瘤的误诊率。
研究目的一、建立实时荧光定量PCR微卫星分析技术(quantitativemicrosatelliteanalysis，QuMA)检测少突胶质细胞肿瘤1p/19qLOH方法；
二、采用实时荧光定量PCR微卫星分析(QuMA)检测所选少突胶质细胞肿瘤染色体1p/19qLOH情况；
三、统计少突胶质细胞肿瘤染色体1p/19qLOH和1pLOH情况与少突胶质细胞瘤形态学特征及免疫组化标记的相关性。
材料和方法一、本课题选取首都医科大学宣武医院病理科1997年至2005年经神经外科开颅术切除和穿刺活检的少突胶质细胞肿瘤标本28例。全部病例均依据WHO2000年分类标准经过形态学和免疫组织化学重新诊断、分级。所有病例均查找原始病历资料，回顾分析其临床病史、外科手术记录。另外，2例脾标本、3例扁桃体标本和3例血栓标本作为正常对照被纳入实验。
二、所有病例标本经常规处理，石蜡包埋后切片，行甲基绿派洛宁染色，在体视显微镜下进行手工显微切割。收集少突胶质细胞瘤组织成份，采用Chelex-100提取石蜡包埋组织的方法提取目的肿瘤组织DNA。选取少突胶质细胞肿瘤1号染色体短臂和19号染色体长臂常见缺失区域设计引物，对样品进行实时荧光定量PCR微卫星分析检测染色体1p和19qLOH情况。
三、对所有病例进行HE染色后观察组织形态特点。选取典型切片行Olig2、GFAP和Ki-67免疫组织化学染色并观测结果。
四、通过四格表χ2检验的确切概率法分析少突胶质细胞肿瘤染色体1p/19qLOH情况与组织学各项指标和免疫组织化学染色结果的相关性。
结果一、一般情况：所选病例包括：少突胶质细胞瘤4例，少突星形细胞瘤13例，间变少突胶质细胞瘤9例，间变少突星形细胞瘤2例。所选病例的手术平均年龄41.4岁(26岁-63岁)，男女比为17∶11，其中肿瘤位于额叶20例，其他部位8例；
二、少突胶质细胞肿瘤染色体1p/19qLOH情况：少突胶质细胞肿瘤病例中有24/28例(85.7％)染色体发生1pLOH;有18/28例(64.3％)染色体发生19qLOH；有17/28例(60.7％)染色体发生1p/19q联合性LOH。
三、少突胶质细胞肿瘤形态学特征：少突胶质细胞瘤镜下肿瘤组织呈蜂窝状，肿瘤细胞核均匀一致，多呈圆形，细胞密度较高。肿瘤组织内血管呈枝芽状穿插在肿瘤细胞群之间，部分病例可有粘液变性，部分有微囊变性，常见有钙化。有些少突胶质细胞瘤组织内含有胞质丰富，核偏位，胞浆GFAP阳性的小肥胖细胞(minigemistocytes)。混合型少突星形胶质细胞瘤组织内同时出现典型的少突胶质细胞瘤成分和星形细胞瘤成分。
四、少突胶质细胞肿瘤免疫组织化学特征：少突胶质细胞肿瘤中的少突胶质细胞瘤细胞和星形细胞瘤细胞都有Olig2的表达，阳性部位是核，但是少突胶质细胞系Olig2的表达多较星形细胞系强。少突胶质细胞肿瘤中肿瘤边缘的反应性星形细胞、大部分肿瘤性星形细胞以及小肥胖细胞GFAP阳性，阳性部位是胞浆和突起，染色较强。肿瘤中的少突胶细胞瘤成份呈散在和灶状GFAP阳性，阳性部位是肿瘤细胞核周围的窄胞浆。Ki-67表达于细胞增殖的所有时期。所有处于增殖期的细胞都可以表达，阳性部位是胞核。我们发现所有少突胶质细胞肿瘤的Ki-67标记指数都比较低，即使是间变型少突胶质细胞肿瘤Ki-67的表达指数也多在10％以内。
五、少突胶质细胞瘤染色体1p/19q联合LOH与组织学特征的相关性：组织学特征中肿瘤细胞核周空晕、枝芽状血管、细胞密度和坏死与少突胶质细胞肿瘤染色体1p/19qLOH和(或)1pLOH有统计学正相关性；免疫组化标记中Ki-67的表达与少突胶质细胞肿瘤染色体1pLOH有统计学正相关性。
结论一、实时定量PCR微卫星分析(QuMA)方法是个快速、简捷、有效的检测少突胶质细胞肿瘤染色体1p/19qLOH方法。
二、我们研究的少突胶质细胞肿瘤大多数发生了1p/19qLOH，少突胶质细胞瘤发生1pLOH较少突星形细胞瘤高，但是没有显著性差异。
三、少突胶质细胞肿瘤染色体1p/19qLOH与肿瘤细胞核周空晕、较高的肿瘤细胞密度和枝芽状血管有统计学正相关性，这些组织学特征作为诊断少突胶质细胞瘤的组织形态学标准比较可靠。