【摘 要】
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颈内动脉冰盐水灌注(ICSI)是最可靠的选择性低温脑保护方式，但持续ICSI所需的液体灌注量过大，会导致电解质紊乱和血液稀释等一系列副作用，限制了其临床应用前景。我们在前期工作
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颈内动脉冰盐水灌注(ICSI)是最可靠的选择性低温脑保护方式，但持续ICSI所需的液体灌注量过大，会导致电解质紊乱和血液稀释等一系列副作用，限制了其临床应用前景。我们在前期工作中，首次将持续ICSI改良为脉冲式ICSI，从而大大的减少了液体灌注量。并发现其对大鼠缺血性卒中(tMCAO模型)同样具有神经保护作用，且安全无副作用。 我们进一步在体外卒中细胞模型（神经元OGD模型）中探讨脉冲式低温抑制缺血损伤的分子靶点机制。我们用E18胎鼠皮层神经元制作90分钟OGD模型，通过CCK-8、ELISA、BCECF AM、Fluo-3AM、DCFH-DA、DHE、JC-1、TUNEL等方法检测不同低温干预策略的细胞活力、MAP-2释放，细胞内pH，细胞内游离钙、ROS、线粒体膜电位（△Ψm）以及细胞死亡。结果发现:90分钟OGD可以导致细胞形态学异常，细胞活力下降，MAP-2释放增加，细胞酸中毒，钙超载，ROS增加，△Ψm下降，最终导致细胞死亡。持续低温与脉冲式低温均有神经保护作用，6小时持续低温不足矣抑制细胞内钙超载，而延长至12小时低温有效。脉冲式低温(6×1h，4×1.5hor3×2h)可以有效抑制细胞内钙超载、活性氧产生、以及△Ψm下降，从而减少OGD神经元死亡。然而脉冲式低温的间断周期只有当大于1.5小时，才可以恢复神经元活力，抑制细胞内酸中毒。 虽然上述研究提示低温确实是一种可靠的非药物性神经保护手段，然而在临床实践中，寒颤是低温最常见的不良反应。许多研究表明，丹曲林在体内体外卒中模型中均有神经保护作用，而且丹曲林可以降低低温的不良反应。提示我们，丹曲林联合低温或可以使卒中患者获益。我们用40μm丹曲林、33℃低温、以及二者联合对90-min OGD神经元干预12小时，结果显示二者联合可以协同保护神经元形态学正常，提高神经元活力，稳定线粒体膜电位，减少活性氧产生，降低组蛋白相关DNA碎片，抑制神经元凋亡。研究表明，丹曲林联合低温可能对缺血性卒中具有协同神经保护作用。
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