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EB病毒是全世界流行的γ型人类疱疹病毒,具有嗜B淋巴细胞性,病因学上与中国南方地区及东南亚的未分化型鼻咽癌(uNPC)、非洲赤道地区的Burkitt淋巴瘤关系密切,这两种疾病在其他地区却比较少见。目前EB病毒及其相关肿瘤的治疗方法依然有限,鉴于病毒在这些疾病的发病机制中所扮演的重要角色,采用EB病毒蛋白抗原的分子干预措施可能是预防治疗EB病毒相关疾病的有效措施。在这些方案中,疫苗接种免疫应该是研究中的首要选择,在本课题中,我们通过基因工程技术构建了gp350和C3d3的融合质粒,希望表达的融合蛋白在进一步研究中具有特异的免疫原性。目的构建EB病毒包膜糖蛋白gp350全长序列及其与三个补体片段C3d串联基因在人体真核细胞中表达的载体,并进行其免疫功能的初步研究。方法以pcDNA3.1+gp350为模板PCR扩增出gp350 cDNA全长片段,将PCR产物经BglⅡ和BamHⅠ酶切消化后与经同样两个限制性内切酶消化的真核表达载体pSG.SS.YL和pSG.SS.C3d3.YL连接,转化后挑取阳性克隆进行PCR、酶切鉴定并测序;然后将纯化的重组载体用脂质体法分别转染人类Hela细胞培养24h,分别用Western blot及细胞免疫化学染色检测gp350蛋白和gp350-C3d3融合蛋白的表达。结果成功构建含gp350全长基因序列的载体pSG.SS.gp350.YL和pSG.SS. gp350.C3d3.YL;转染人类Hela细胞后,经细胞免疫化学染色及Western blot检测显示:转染组均能常规水平表达,对照组则无该蛋白表达,但两转染组的表达量无明显差异。结论成功构建gp350的两个真核表达质粒,并能够在人体Hela细胞中表达相应蛋白,为下一步进行在体内免疫环境下检测其生物学活性奠定基础。