具有抗菌或杀虫活性微生物的筛选及其活性产物初步研究

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本研究对从广西玉林等林木地采集到的17份土样样品中的微生物进行了分离培养及筛选,对具有抗菌或杀虫活性的微生物进行了分类鉴定,并对菌株YLZ42的活性代谢产物进行了初步研究。主要有以下四章研究内容和结果:  第一章:微生物的分离及具有抗菌活性菌株的筛选采用稀释涂布法对土样样品进行分离培养,共分离出234株细菌、165株真菌、135株放线菌。以大肠杆菌(Escherichai coli)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、白色念珠菌(Candida albicans)、甜瓜疫霉(Phytophthora meloms katsura)、苹果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporio ides)为病原指示菌,采用琼脂块法进行初筛,获得至少对一种病原指示菌有抗性的真菌38株,放线菌64株;根据初筛结果,从中选取抗菌活性较强的真菌和放线菌各15株,采用管碟法进行复筛验证,获得对两种及以上病原指示菌有抗菌活性的真菌9株,放线菌11株。  第二章:产杀虫活性物质菌株的筛选及生物测定以卤虫为指示虫,采用96孔板进行杀虫活性初筛,获得其发酵液毒杀卤虫校正死亡率为100%的真菌4株,其编号分别SLZ14、SLZ46、SLZ62、YLZ42;获得其发酵液乙酸乙酯萃取物毒杀卤虫校正死亡率在85%以上的放线菌8株,其编号为SLF13、SLF16、SLF24、SLF40、YLF6、YLF24、TWF22、TWF26。以蚜虫为指示虫,采用喷雾法对初筛获取的12株菌株进一步复筛,结果表明,其具有不同程度的杀蚜虫活性。同时测定这些菌株的发酵液乙酸乙酯萃取物对小菜蛾、棉铃虫、甜菜夜蛾的杀虫活性,结果显示,其发酵液乙酸乙酯萃取物毒杀小菜蛾、棉铃虫的校正致死率在50%以上的菌株有10株,毒杀甜菜夜蛾的校正死亡率在50%以上的菌株有11株。  第三章:菌株的分类鉴定及系统发育分析根据培养特征、形态特征及18SrDNA、ITS序列分析,对菌株SLZ14、SLZ46、SLZ62、YLZ42进行了分类鉴定,并根据测序结果构建系统发育树,结果显示SLZ14、SLZ46属于绿僵菌(Metarhizium anisopliae),SLZ62为绿色木霉(Trichoderm aviride),YLZ42为淡色生赤壳菌(Bionectria ochroleuca);根据培养特征、形态特征、生理生化特征及16SrDNA序列分析,对菌株SLF13、SLF16、SLF24、SLF40、YLF6、YLF24、TWF22、TWF26进行了分类鉴定,并根据测序结果构建系统发育树,结果表明SLF13、SLF16、SLF24、SLF40、YLF6、YLF24、TWF22均为链霉菌属(streptomyces)的不同种,TWF26为东方拟无枝酸菌(Amycolatopsis orientalis)。  第四章:菌株YLZ42活性产物初步研究对YLZ42菌株的杀虫活性产物的稳定性进行了研究,结果表明,其活性产物对紫外线和蛋白酶K稳定性很好,受pH、温度的影响小。通过薄层层析与生物自显影、高效液相色谱分析方法对其抗菌活性产物进行初步分离。结果表明,HPLC条件设定为检测波长254nm,流动相为乙睛:水=2:3,流速0.5ml/min时,抗菌活性产物在11.496min有单峰,该峰样品经ESI-MS检测,其可能含有2个组分,相对分子量分别为336.1251与368.1515。
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