【摘 要】
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胰高血糖素(Glucagon,GCG)是由29个氨基酸组成的由胰岛α细胞分泌的一种血糖调节激素,能够促进肝糖原分解和糖异生,使血糖升高。胰高血糖素样肽-1(Glucagon-like peptide1,Gl
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胰高血糖素(Glucagon,GCG)是由29个氨基酸组成的由胰岛α细胞分泌的一种血糖调节激素,能够促进肝糖原分解和糖异生,使血糖升高。胰高血糖素样肽-1(Glucagon-like peptide1,Glp-1)是由肠道细胞在人体进食后分泌的一种间接调节血糖的激素,当血糖升高时,以葡萄糖浓度依赖方式作用于胰岛β细胞,促使胰岛素分泌增多;同时可以强烈抑制胰高血糖素的分泌;从而达到降低血糖的作用。因此GCG及GLP-1的研究对于糖尿病新药的研发具有重要意义。 近年来,利用非天然氨基酸标记技术在蛋白中引入19F核磁信号的方法来研究蛋白性质成为了研究热点。本课题主要使用19F液体核磁共振技术和同位素标记方法对这两种激素进行研究。4-fluoro-L-phenylalanine(4F-Phe)是一种苯丙氨酸类似物,同苯丙氨酸相比,分子内一个氢原子被氟取代。有相关文献报道其能被细菌利用,进而使蛋白拥有19F NMR信号。这里我们在野生型多肽GCG的Phe-6和Phe-22残基中分别引入非天然氨基酸4F-Phe,通过在不同浓度重水中19F的溶剂效应实验来研究Phe-6和Phe-22在溶剂中的暴露程度。研究结果表明4F-Phe6完全暴露在溶剂中,而4F-Phe22只有部分暴露。在多肽中引入19F NMR的方法为进一步研究多肽与膜蛋白的相互作用提供了全新的思路和实验基础。 除了引入19F外,我们还通过传统的同位素标记方法标记了GCG和Glp-1,并根据HSQC、HNCO、HNCA、HN(CO)CA、HN(CA)CO、HNCACB和HN(CO)CACB等二维、三维NMR实验结果对这两种多肽的残基进行了主链谱峰归属,并尝试利用同位素标记样品研究多肽和其受体的体外相互作用,为以后进一步研究与受体结合状态下多肽的结构特点打下了良好的基础。
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