【摘 要】
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目的：中毒性休克毒素-1（TSST-1）在金黄色葡萄球菌致病中起重要作用。本研究构建金黄色葡萄球菌pGEX-4T-1/TSST-1重组质粒，表达、纯化重组TSST-1；检测金黄色葡萄球菌所致扁桃体炎患
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目的：中毒性休克毒素-1（TSST-1）在金黄色葡萄球菌致病中起重要作用。本研究构建金黄色葡萄球菌pGEX-4T-1/TSST-1重组质粒，表达、纯化重组TSST-1；检测金黄色葡萄球菌所致扁桃体炎患儿临床分离株TSST-1基因携带率及患儿的血清TSST-1特异性抗体水平。检测TSST-1刺激金黄色葡萄球菌所致扁桃体炎患儿外周血单个核细胞（PBMCs）IFN-γ和IL-6的表达，并探讨血清TSST-1特异性抗体水平与IFN-γ、IL-6表达水平的关系。 方法：根据GeneBank公布的TSST-1基因序列设计特异性引物，对TSST-1基因PCR扩增及克隆，构建pGEX-4T-1/TSST-1重组表达质粒。用GST融合蛋白纯化柱纯化GST-TSST-1融合蛋白，使用凝血酶切除融合蛋白的GST标签得到纯化的重组TSST-1蛋白。采用PCR检测扁桃体炎患儿扁桃体中分离金黄色葡萄球菌TSST-1基因。使用重组TSST-1蛋白包被酶标板，ELISA检测金黄色葡萄球菌所致扁桃体炎患儿和健康儿童的血清TSST-1特异性抗体（IgG、IgG1和IgG2）水平。 TSST-1刺激金黄色葡萄球菌所致扁桃体炎患儿PBMCs，ELISA法检测PBMCs上清中的IFN-γ和IL-6细胞因子水平。 结果：成功构建了pGEX-4T-1/TSST-1高效表达载体，经IPTG诱导获得分子量约52 kDa（26 kDa GST+26.45 kDa TSST-1）的融合蛋白，纯化及凝血酶切后得到高纯度的重组TSST-1蛋白，分子量约为26.45 kDa。40株金黄色葡萄球菌的TSST-1基因检出率为67.5％。金黄色葡萄球菌感染扁桃体炎患儿血清TSST-1特异性抗体IgG、IgG1、IgG2水平分别为（0.447±0.302）、（0.295±0.074）、（0.194±0.087）；健康儿童组血清TSST-1特异性抗体IgG、IgG1、IgG2水平分别为（0.183±0.069）、（0.175±0.074）、（0.164±0.077）。金黄色葡萄球菌扁桃体炎患儿和健康儿童在血清TSST-1特异性IgG、IgG1抗体水平存在显著差异。以健康儿童血清TSST-1特异性IgG为阴性对照建立ROC曲线，得到TSST-1特异性IgG的CUTOFF值为0.288。金黄色葡萄球菌扁桃体炎患儿血清TSST-1特异性IgG的阳性率为70%。患儿PBMCs受到TSST-1刺激时培养上清IFN-γ和IL-6的水平均比健康儿童的高，IFN-γ在两者之间存在显著差异。患儿血清TSST-1特异性IgG阴性组IFN-γ和IL-6的表达含量均高于TSST-1特异性IgG阳性组和健康组，而TSST-1特异性IgG阳性组IFN-γ和IL-6的含量均低于TSST-1特异性IgG阴性组和健康组。患儿血清TSST-1特异性IgG与PBMCs培养上清IFN-γ和IL-6水平呈负相关。 结论：获得重组TSST-1的高效表达，纯化的重组TSST-1具有免疫学活性。TSST-1刺激患儿PBMCs中细胞因子IFN-γ显著升高，诱导患儿Th1优势免疫。TSST-1在金黄色葡萄球菌扁桃体炎致病中起到重要的作用。
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