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莫达非尼(modafini)是一种新型的中枢精神兴奋药物,动物实验和临床试验均证实莫达非尼有良好的精神兴奋和警觉促进作用,已成功用于临床治疗嗜睡症和发作性睡病,是目前治疗这两种与睡眠有关疾病的最好药物.近年来的研究发现,莫达非尼在多种动物模型中均表现明显的神经保护作用.该论文研究了莫达非尼对PC12细胞和大鼠大脑皮层神经细胞的保护作用,并对其机理进行了初步的研究和探讨.我们运用连二亚硫酸钠损伤模型模拟细胞缺氧,使用过氧化氢和硝普钠造成细胞的氧自由基损伤模型,考察莫达非尼对这些因素引起的PC12细胞损伤的保护作用.主要通过MTT法,测定PC12细胞存活率的变化,研究莫达非尼对过氧化氢和硝普钠引起的细胞内乳酸脱氢酶外漏的影响.结果发现莫达非尼能够抑制连二亚硫酸钠,过氧化氢,硝普钠以及谷氨酸对PC12细胞的损伤,提高PC12细胞的存活率.莫达非尼对PC12细胞具有保护作用.我们运用流式细胞仪进行细胞周期分析和细胞凋亡率的检测,发现PC12细胞同200μM过氧化氢或者500μM的硝普钠作用24h后,凋亡的PC12细胞明显增加,其凋亡率分别为32.65﹪和21.5﹪.预先给予15μM的莫达非尼作用30min,则过氧化氢和硝普钠诱导的PC12细胞凋亡率分别降低为7.95﹪和9.2﹪.莫达非尼能够显著降低过氧化氢和硝普钠诱导的PC12细胞凋亡率,对过氧化氢和硝普钠诱导的PC12细胞凋亡有抑制作用.通过原代培养大鼠大脑皮层神经细胞,我们研究了莫达非尼对皮层神经细胞的保护作用.主要考察了去除血清和激动谷氨酸受体两种损伤方式对神经细胞的存活率的影响,以及对谷氨酸引起的大鼠皮层神经细胞内乳酸脱氢酶外漏的影响.对于莫达非尼的神经保护作用,我们对其机理也进行了研究,主要考察了莫达非尼对细胞内自由基水平的影响,以及对过氧化氢降低细胞线粒体膜电位的影响.研究发现,通过测定二氯荧光素(DCF)的荧光强度可以反映细胞内活性氧的水平,但是,各种浓度的莫达非尼对200μM过氧化氢引起的PC12细胞内的活性氧水平升高没有影响.表明莫达非尼对PC12细胞的保护作用不是通过清除细胞内自由基这条途径,可能是以其他的方式来保护PC12细胞免受过氧化氢的损伤.另外,由于荧光染料罗丹明123(Rh123)主要聚集在细胞的线粒体内,通过使用流式细胞仪来测定细胞内的Rh123荧光强度可以反映细胞线粒体膜电位的变化.莫达非尼能够抑制过氧化氢引起的细胞线粒体膜电位水平下降.因此,莫达非尼对过氧化氢引起的PC12细胞损伤的保护作用可能与影响细胞线粒体膜电位有关.另外,早期的研究发现莫达非尼可以影响细胞内的能量代谢,并且能够部分阻断兴奋性氨基酸受体.这些作用可能都参与了莫达非尼对神经细胞的保护作用,但是关于其详细的神经保护机制还有待进一步的研究.