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嗜麦芽黄单胞菌(Xanthomonas maltophilia ATCC13637)属于Gˉ,既具有类似哺乳动物调节妊娠与生殖的LH/CG(黄体生成素/绒毛膜促性腺激素)受体的CG类受体蛋白(CG-like receptor),又能分泌分子量为48.5KD、与hCG分子β链有一定同源性的xCG蛋白.X maltophilia是第一个发现既具有内源性配基(xCG蛋白),又具有受体(CG样受体)的原核生物.X maltophilia CG样受体在蛋白质分子量、配基结合特性等方面与大鼠LH/CG受体有一定的相似性,至今对该菌CG样受体的基因、结构与功能均不清楚.为了进一步了解嗜麦芽黄单胞菌CG样受体的生物学功能,深入研究其结构,需从分子水平研究编码CG样受体的基因及其结构特点,并与哺乳类LH/CG受体基因及其蛋白序列进行比对分析.这对于探讨原核生物CG样受体与真核生物LH/CG受体是否存在共源性,以及该菌的致病机制均有重要意义.首先,鉴定确证菌种X maltophilia ATCC13637属于嗜麦芽黄单胞菌;并建立了一种快速简便提取嗜麦芽黄单胞菌基因组DNA的方法,即用去污剂SDS和CTAB破坏细胞膜结构,使胞内核酸释放,用酚/氯仿/异戊醇去除CTAB/多聚糖/蛋白质复合物,异丙醇沉淀DNA,TE溶解DNA.该方法简便快速,节省实验试剂和时间;所提取的DNA纯度和浓度均较好,为进一步酶切分析、PCR操作及构建基因组文库提供了良好的实验材料.其次,根据已知生物LH/CG受体同源性较大的跨膜域序列设计了一对引物,以嗜麦芽黄单胞菌基因组DNA为模板进行PCR扩增,约600bp目的PCR产物克隆到pUCm-T载体上,经酶切及PCR扩增鉴定,获得重组质粒pUCm-Rec.以DIG标记的PCR扩增片段作为探针进行DNA斑点杂交,探针与Xba Ⅰ消化的重组质粒(pUCm-Rec)DNA和嗜麦芽黄单胞菌染色体DNA有阳性杂交信号,说明约600bpPCR扩增片段与嗜麦芽黄单胞菌染色体DNA有同源性,是以嗜麦芽黄单胞菌染色体DNA为模板的扩增结果.第三,自行构建了嗜麦芽黄单胞菌基因组文库,并对文库进行了筛选.对阳性信号菌落的质粒进行Pst Ⅰ酶切鉴定后,对杂交信号强的4个菌落的质粒进行测序分析,未获得嗜麦芽黄单胞菌CG样受体的全基因序列.但是,685bp克隆片段与编码组氨酸激酶/反应调节子杂合蛋白的野油菜黄单胞菌XCC2846基因和柑桔黄单胞菌XAC3030基因部分序列有较大的相似性和同源性,表明在嗜麦芽黄单胞菌中存在着编码组氨酸激酶/反应调节子杂合蛋白的基因和功能蛋白.另一375bp片段编码125aa完整ORF与柑桔黄单胞菌铁受体蛋白部分序列有32﹪相同氨基酸残基,表明嗜麦芽黄单胞菌可能具有编码类似铁受体蛋白的基因和功能蛋白质.为诠释嗜麦芽黄单胞菌的基因功能,深入了解该菌的遗传、进化和生物学地位提供了实验依据.越来越多的研究表明,LH/CG受体及其配基均具有异质性.因此,我们还对X maltophilia配基xCG蛋白的基因多型性进行了研究.