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目的:类风湿性关节炎是一种慢性系统性疾病，其发病机理不明，目前只能依靠药物治疗缓解病情。来氟米特(LEF)是一种新型抗类风湿性关节炎的免疫抑制剂，其主要通过抑制二氢乳酸脱氢酶而发挥免疫抑制作用，疗效好，耐受性好，1998年被FDA批准上市。然而，临床用药后发现其导致的肝毒性反应明显，因此，2011年FDA给予其黑框警告。其活性代谢产物泰瑞米特(TER)，最近的临床研究也发现具有肝脏毒性而受到FDA黑框警告。但是，目前二者的肝毒性损伤机制尚未被阐明，本课题对肝脏细胞色素P450酶(CYP450)和药物转运体对LEF肝毒性的贡献进行了系统性研究，同时考察TER在此过程中的作用。 方法:利用蛋白质组学方法考察LEF和TER对大鼠原代肝细胞中蛋白质表达的影响。使用Real-Time PCR方法检测LEF和TER对多种代谢酶和转运体基因表达的影响。使用CYP450酶非专一性抑制剂aminobenzotriazole(ABT)、proadifen（SKF）研究CYP450酶在LEF肝毒性和代谢中的作用。通过细胞活性(MTT)实验、线粒体膜电位(MMP)实验来比较LEF和TER两者的毒性大小。同时运用肝脏P450酶功能缺陷型小鼠（HRN小鼠）对LEF的药物代谢动力学和毒性进行体内研究。通过D8-TCA的细胞摄取实验研究LEF和TER对钠离子/胆酸共转运体(NTCP)功能的影响。长期口服给予Sprague Dawley(SD)大鼠TER4周后，研究其对NTCP体内功能的影响。 结果:蛋白质组学分析发现，在大鼠原代肝细胞中，LEF都能够显著引起CYP450表达的变化;与其一致的是，LEF能够明显引起大鼠和人原代肝细胞中CYP1A1/2的mRNA表达升高。随后的研究表明，CYP450酶抑制剂能够减缓LEF代谢为TER，造成细胞内蓄积，从而引起肝毒性明显增加。细胞毒性实验也表明LEF的毒性比TER的毒性大。体内实验表明，口服给予LEF（15 mg·kg-1）后，与野生型(WT)小鼠相比，HRN小鼠血浆中LEF的浓度和药时曲线下面 积(AUC)都升高了，同时其代谢产物TER的血浆暴露量降低。连续口服给予LEF(50 mg·kg-1)7天后，HRN小鼠的生存率明显比WT小鼠低。25 mg·kg-1剂量组HRN小鼠血清谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶（ALT）显著升高，而WT小鼠中没有明显变化。 TER能够明显抑制(NTCP) mRNA的表达。功能学实验表明，在大鼠原代肝细胞和人源NTCP-稳定转染的HEK293细胞中，TER能够明显抑制NTCP的底物d8-TCA的胞内摄取。体内实验表明，连续给药4周后，TER(6，12 mg·kg-1)能够显著引起大鼠血清中TBILI、DBILI水平的升高。 结论:CYP450参与了LEF的肝脏解毒过程。LEF代谢为TER后，毒性减弱。TER能够抑制转运体NTCP的表达和功能，从而造成胆汁淤积，可能是LEF和TER导致肝损伤的原因之一。