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抗菌肽(antimicrobial peptides)是一类能够抑制细菌、真菌的小分子多肽。到目前为止,2600多种抗菌肽被分离并鉴定。抗菌肽不但具有良好的抑菌效果,而且不易产生耐药性,是传统抗生素的潜在替代物之一。抗菌肽Metchnikowin(Metch)富含脯氨酸,由26个氨基酸残基组成,能够抑制革兰氏阳性菌和真菌的生长。本论文主要研究抗菌肽Metch在大肠杆菌BL21(DE3)中的分泌表达和胞内可溶性表达。利用本实验室克隆的Metch基因和大肠杆菌中的分泌蛋白Yeb(eYeb)基因,构建了适合在BL21(DE3)分泌表达的载体pET28b-sp-eYeb-RS-Metch(P-1),经IPTG诱导后抗菌肽在eYeb引导下成功分泌到细胞外。融合蛋白eYeb-RS-Metch分泌表达的最佳条件为在30℃、200 rpm和0.3 mM的IPTG条件下,诱导表达24 h。Yeb作为分泌蛋白对抗菌肽的分泌表达量具有重要影响。为研究不同来源的Yeb蛋白对抗菌肽分泌表达的影响,本论文将沙门氏菌的Yeb(sYeb)基因与抗菌肽Metch基因融合,构建新的表达载体pET28b-sp-sYeb-RS-Metch(P-2),发现与大肠杆菌eYeb蛋白相比,沙门氏菌的sYeb蛋白与抗菌肽Metch融合,其分泌表达量有一定提高。重组蛋白Yeb-RS-Metch经特异性蛋白酶TEV酶切后,产生的重组抗菌肽对金黄葡萄球菌和藤黄微球菌表现出明显的抑菌活性。本论文还对抗菌肽Metch在大肠杆菌细胞内的表达进行了探索,利用泛素(Ub)作为载体蛋白,构建了表达载体pET28b-His-Ub-RS-Metch(P-4)。结果表明,该载体诱导表达的最佳条件为在20℃、150 rpm、0.1 mM的IPTG条件下,诱导表达24 h。融合蛋白His-Ub-RS-Metch经镍柱亲和层析可得到有效纯化,纯化后的融合蛋白经特异性TEV酶酶切后释放抗菌肽,抑菌圈法检验显示,重组抗菌肽Metch具有抑制金黄葡萄球菌生长的活性。本实验用沙门氏菌的sYeb蛋白替换大肠杆菌中的eYeb蛋白,提高了抗菌肽Metch的分泌表达量;与分泌表达相比,以泛素作为融合标签的胞内表达量得到进一步提高,初步建立了抗菌肽Metch在大肠杆菌的表达纯化体系。