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目的利用S100β基因修饰的嗅鞘细胞体外炎症模型,探讨S100β对炎症环境中嗅鞘细胞的作用及机制。方法(1)嗅球取自新生7天SD乳鼠,嗅鞘细胞(OECs)的培养采用差速贴壁改良法联合胰酶限时消化法纯化;(2)利用慢病毒载体LV5(EF-1a F/GFP&Puro)分别将S100β或空载体转染嗅鞘细胞并分组为S100β-OECs组和空载体-OECs组;采用流式细胞仪验证转染效率。(3)利用CCK-8法在1、3、5、7d分别检测病毒转染OECs(S100β-OECs组/空载体-OECs组)和未转染OECs对照组细胞增殖情况。(4)通过在两组培养体系添加重组IFN-γ建立嗅鞘细胞的体外炎症模型,在诱导炎症0、3、6、12、24h后,通过TUNNEL染色法观察各组OECs凋亡状况;(5)采用实时荧光定量PCR检测S100β-OECs组和空载体-OECs组的S100β、凋亡因子Bax、Puma、抗凋亡因子Bcl-2和炎症相关因子INOS、IL-1β、TNF-α的基因表达水平;利用蛋白免疫印迹法检测两组在诱导炎症后不同时间点的S100β、p65、p38、ERK1/2、P-JNK等蛋白含量,探讨S100β对炎症环境中嗅鞘细胞的作用机制。结果1.采用改良方法原代培养的大鼠嗅鞘细胞纯度为82.7%。2.采用LV5载体构建的S100β过表达载体平均转染效率为74%。3.采用CCK-8法绘制细胞生长曲线显示,三组间细胞增殖能力无统计学差异(P>0.05)。4.在加入INF-γ后6、12和24h,S100β-OECs组的抗凋亡因子Bcl-2表达水平较空载体-OECs组高(P<0.05),S100β-OECs组的炎症因子INOS、IL-1β、TNF-α和凋亡因子Bax、Puma表达水平较空载体-OECs组低(P<0.05)。5.TUNNEL染色结果显示,在INF-γ诱导后0、3、6h和12h,两组TUNNEL阳性细胞数目无差异(P>0.05);在致炎24h后,空载体-OECs组TUNNEL阳性细胞数目明显多于S100β-OECs组(P<0.05)。6.在INF-γ诱导后3h,两组中S100β表达均上升(P<0.05),但致炎6h、12h及24h后,两组中S100β表达均持续下降(P<0.05);同一时间点内,S100β-OECs组S100β蛋白表达均高于空载体-OECs组(P<0.05)。7.空载体-OECs组中NFκB p65蛋白表达在致炎后3h开始出现上调(P<0.05),在6h上调达到峰值;而S100β-OECs组NFκB p65蛋白表达在致炎后3h出现下调(P<0.05),在6h后出现上调趋势。致炎后3h、6h、12h后S100β-OECs组NFκB p65蛋白表达水平均明显低于同一时间点空载体-OECs组(P<0.05)。8.致炎后3h,两组中p38蛋白表达水平均出现下调(P<0.05),致炎后6h,空载体-OECs组中p38蛋白表达水平出现上调并达到顶峰(P<0.05)。致炎后3h、6h、12h,S100β-OECs组的p38蛋白表达低于空载体-OECs组(P<0.05)。致炎后不同时间点,两组中ERK1/2蛋白及P-JNK蛋白均无明显变化(P>0.05)。结论1.在体外细胞实验S100β能够抑制OECs释放炎症相关因子。2.S100β可降低炎症条件下OECs凋亡率,从而提高其存活率。3.S100β蛋白可能通过介导NFκB p65/MAPK p38通路调控炎症环境中OECs的炎症反应机制。