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目的： 类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是一种以滑膜增生、血管翳形成和炎性细胞浸润为主要病理特征的系统性自身免疫病，最终可造成患者关节的破坏和畸形。RA滑膜因其中的缺氧微环境、细胞大量增生和侵袭表型被认为是一种“肿瘤样组织”。已知有成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes,FLS）、巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞和中性粒细胞等多种细胞参与RA的发病机制。其中，FLS在RA滑膜中迁移、侵袭和增殖能力的增加，是RA滑膜增生和侵袭性血管翳形成的基础。有研究报道缺氧微环境可通过上调细胞骨架蛋白肌成束蛋白（fascin1,FSCN1）的表达，促进细胞的迁移与侵袭。本研究旨在探究RA滑膜缺氧微环境对FLS迁移和侵袭能力的影响及其可能的分子机制，为临床治疗或缓解RA病程提供新的靶点。 方法： 1.本实验所用滑膜标本均取自于2015年9月至2017年4月期间，行关节镜和关节置换术的RA和骨关节炎（osteoarthritis,OA）患者。其中，RA8例，OA15例。 2.应用免疫组织化学染色法检测RA和OA滑膜中FSCN1和HIF-1α的表达；应用组织免疫荧光染色法分析RA和OA滑膜中FSCN1和HIF-1α表达的共定位；定量聚合酶链反应（quantitative polymerase chain reaction,q-PCR）检测FSCN1和HIF-1α的mRNA在RA和OA滑膜中的表达情况。 3.采用联合酶消化法分离RA/OA FLS并体外培养，分别应用q-PCR和免疫印迹法（western blot,WB）检测FSCN1的mRNA和蛋白在RA/OA FLS中的基础表达。 4.应用氯化钴造成实验性缺氧，模拟RA滑膜缺氧微环境。应用q-PCR、WB和细胞免疫荧光染色法检测实验性缺氧时RA FLS中HIF-1α表达的变化. 5.应用q-PCR和免疫细胞化学染色法检测实验性缺氧时RA FLS中FSCN1表达的变化；应用RNA干扰技术降表达RA FLS中的HIF-1α；应用q-PCR和WB检测RA FLS中siHIF-1α的干扰效率及FSCN1的表达。 6.应用Transwell法检测实验性缺氧及siHIF-1α对RA FLS迁移和侵袭能力的影响；应用MTT分析实验性缺氧对于RA FLS增殖能力的影响。 7.应用WB评估STAT3通路在“缺氧调控RA FLS迁移和侵袭”这一过程中的作用。 8.计量资料以x-±s表示，两组资料间比较采用独立样本t检验；多组资料间比较采用单因素方差分析，再用SNK-q检验进行组间多重比较。检验水准为双侧α=0.05。所有数据均采用SPSS16.0软件包进行分析。 结果： 1.病理学结果显示，FSCN1和HIF-1α在RA滑膜高表达，主要分布于滑膜衬里层和衬里下层的细胞聚集区域，且FSCN1和HIF-1α可见大量共定位，HIF-1α与细胞核有较好共定位；而OA滑膜中FSCN1和HIF-1α呈弱表达。q-PCR结果显示，RA滑膜中FSCN1（4.4375±0.72780vs.1.0000±0.51235,t=9.460，P<0.001）和HIF-1α（3.0435±1.64002vs.0.9983±0.53323,t=2.905,P=0.027）的mRNA显著高于OA。 2.成功分离RA/OA FLS并行体外培养，FLS形态呈典型的纺锤形或长梭形，旋涡状生长。q-PCR和WB结果显示，RA FLS中FSCN1的mRNA（2.9033±0.10786vs.1.0000±0.01732,t=30.178,P=0.001）和蛋白（1.8733±0.14189vs.1.0000±0.11790,t=8.200,P=0.001）水平均显著高于OA FLS。 3.q-PCR、WB和细胞免疫荧光结果显示，实验性缺氧下调RA FLS中HIF-1α的mRNA表达（1.0000±0.10440vs.0.2300±0.01000,t=12.716,P=0.006），上调HIF-1α的蛋白表达（F=4245.613,P<0.001），促进HIF-1α蛋白的核转移。 4.q-PCR和免疫细胞化学染色结果显示，实验性缺氧上调RA FLS中FSCN1的mRNA（1.0000±0.02646vs.2.1900±0.02646,t=-55.086,P<0.001）和蛋白的表达；q-PCR和WB结果显示，HIF-1α的干扰成功，其mRNA（1.0148±0.05677vs.0.4530±0.03010,t=15.143,P<0.001）和蛋白（1.0000±0.01339vs.0.6111±0.01954,t=28.433,P<0.001）水平均显著降低；q-PCR和WB结果显示，siHIF-1α下调实验性缺氧时RA FLS中的FSCN1的mRNA（1.0012±0.05957vs.0.5461±0.01764,t=12.688,P<0.001）和蛋白（1.0000±0.00000vs.0.6940±0.01878,t=28.221,P=0.001）水平。 5.细胞迁移实验结果显示，实验性缺氧（55.6000±6.98570vs.102.4000±5.68331,t=-11.620,P<0.001）促进RA FLS的迁移；而HIF-1α的mRNA干扰后，RA FLS的迁移能力明显降低（102.4000±5.68331vs.74.8000±7.69415,F=59.170,P<0.001）。细胞侵袭实验结果显示，实验性缺氧（138.66667±4.72582vs.198.6667±6.02771,t=-13.568,P<0.001）促进RA FLS的侵袭；而HIF-1α的mRNA干扰后，RA FLS的迁移能力明显降低（190.3333±5.85947vs.148.3333±2.51661,F=142.912,P<0.001）。MTT结果显示，实验性缺氧可显著抑制RA FLS的增殖，且其抑制能力与浓度呈正相关关系（F=577.700,P<0.001）。 6.WB显示实验性缺氧可显著上调RA FLS中FSCN1、HIF-1α的表达和STAT3的磷酸化。 结论： 1.FSCN1和HIF-1α在RA滑膜均高表达，且二者存在共定位。 2.缺氧条件下，HIF-1α通过上调FSCN1的表达，促进RA FLS的迁移和侵袭。 3.STAT3通路可能参与“缺氧调控RA FLS迁移和侵袭”这一过程的调控。 本研究结果提示RA滑膜缺氧微环境可能是FLS迁移和侵袭能力增加的重要原因，而FSCN1和HIF-1α则在其中起着至关重要的作用，RA FLS中“HIF-1α上调FSCN1的表达”可能同时接受STAT3通路的调控。