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目的：构建含有rhGM-CSF基因的重组腺病毒载体，为进一步研究奠定基础。 方法：以含有rhGM-CSF全序列的质粒sp64为模板，自行设计一对分别含有Blg Ⅱ和Hind Ⅲ酶切位点的rhGM-CSF基因上下游引物，通过PCR扩增获得rhGM-CSF基因全部序列。片段回收后经酶切，亚克隆于腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV，获得重组质粒pAdTrack-rhGM-CSF。经BlgⅡ和HindⅢ双酶切、PCR及插入片段测序鉴定后，Pme Ⅰ酶切使之线性化，与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1共转染BJ5183细菌，经细菌内同源重组产生携带rhGM-CSF基因的重组腺病毒载体pAd-rhGM-CSF。用选择性培养基筛选阳性克隆，提取质粒，Pac Ⅰ酶切线性化后用脂质体法转染293细胞，包装产生重组腺病毒Ad-rhGM-CSF。通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达及RT-PCR等方法鉴定重组的腺病毒。 结果：成功构建了含有rhGM-CSF基因的重组腺病毒载体pAd-rhGM-CSF，能在真核细胞中有效表达。 结论：该重组腺病毒载体的构建成功，为GM-CSF的进一步应用于基因治疗，GM-CSF基因瘤苗的研制等奠定了一定的基础。