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【目的】：
1.探讨miR-186在缺血性脑卒中动物模型和细胞模型中的表达量变化。
2.探讨miR-186在氧糖剥夺/复氧（OGD/R）条件下对小鼠脑神经瘤细胞（N2a）生物学行为的影响。
3.探讨miR-186靶向调节Hif-1α在OGD/R致N2a神经细胞缺血性损伤中的作用。
【方法】：
1.利用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型(Middlecerebralarteryocclusion，MCAO)，建立N2a细胞氧糖剥夺/复氧（Oxygen-glucosedeprivation/Reperfusion，OGD/R）模型，通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测miR-186的表达变化；
2.利用miR-186过表达及miR-186海绵载体慢病毒构建稳定过表达和抑制miR-186表达的细胞株，qRT-PCR验证miR-186的表达；
3.通过MTT、LDH、ROS、Annexinv-FITC/PI双染色、western-blot等实验检测miR-186对细胞增殖、细胞毒性、氧化应激和凋亡的影响；
4.利用双荧光素酶实验验证miR-186与Hif-1α之间的关系，western-blot检测miR-186过表达或抑制后对Hif-1α表达的影响；
5.在miR-186表达抑制的细胞内采用siRNA敲低Hif-1α的表达，通过MTT，LDH，ROS，Annexinv-FITC/PI双染色和western-blot实验检测OGD/R对细胞增殖、细胞毒性、氧化应激及凋亡的影响。
【结果】：
1.与假手术组相比，在MCAO模型大鼠脑梗死皮层中miR-186的表达显著下降（P<0.05），在N2a细胞氧糖剥夺4h后复氧，miR-186的表达先逐渐下降后升高，复氧12h时miR-186下调最明显（P<0.01）；
2.通过嘌呤霉素筛选构建了稳定过表达和抑制miR-186的N2a细胞株。与空载对照组相比，在过表达细胞株里miR-186表达明显升高（P<0.0001）,在抑制细胞株里miR-186表达显著下调（P<0.01）。
3.miR-186过表达促进细胞增殖、降低细胞毒性、减轻氧化应激、减少细胞凋亡，而相反地，抑制miR-186表达可减缓细胞增殖、增加细胞毒性、加剧氧化应激、促进细胞凋亡。此外，miR-186过表达能减少促凋亡蛋白Bax及Cl-caspase3的表达，增加抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，而抑制miR-186的表达则能增加促凋亡蛋白Bax及Cl-caspase3的表达，抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。
4.双荧光素酶报告基因实验证实miR-186能特异性靶向Hif-1α的3’端非翻译区，从而抑制Hif-1α的表达。
5.敲低Hif-1α的表达可以改善抑制miR-186对OGD/R损伤引起的N2a细胞增殖、细胞毒性、氧化应激及凋亡的影响（P<0.05）。
【结论】：
1．miR-186在缺血性脑卒中大鼠MCAO模型及OGD/R细胞模型中表达均下调。
2．miR-186可以改善OGD/R处理对N2a细胞的损伤，促进细胞增殖，减轻氧化应激，减少细胞凋亡。
3．miR-186可能通过靶向调节Hif-1α在OGD/R致N2a神经细胞缺血性损伤中发挥保护作用。
1.探讨miR-186在缺血性脑卒中动物模型和细胞模型中的表达量变化。
2.探讨miR-186在氧糖剥夺/复氧（OGD/R）条件下对小鼠脑神经瘤细胞（N2a）生物学行为的影响。
3.探讨miR-186靶向调节Hif-1α在OGD/R致N2a神经细胞缺血性损伤中的作用。
【方法】：
1.利用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型(Middlecerebralarteryocclusion，MCAO)，建立N2a细胞氧糖剥夺/复氧（Oxygen-glucosedeprivation/Reperfusion，OGD/R）模型，通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测miR-186的表达变化；
2.利用miR-186过表达及miR-186海绵载体慢病毒构建稳定过表达和抑制miR-186表达的细胞株，qRT-PCR验证miR-186的表达；
3.通过MTT、LDH、ROS、Annexinv-FITC/PI双染色、western-blot等实验检测miR-186对细胞增殖、细胞毒性、氧化应激和凋亡的影响；
4.利用双荧光素酶实验验证miR-186与Hif-1α之间的关系，western-blot检测miR-186过表达或抑制后对Hif-1α表达的影响；
5.在miR-186表达抑制的细胞内采用siRNA敲低Hif-1α的表达，通过MTT，LDH，ROS，Annexinv-FITC/PI双染色和western-blot实验检测OGD/R对细胞增殖、细胞毒性、氧化应激及凋亡的影响。
【结果】：
1.与假手术组相比，在MCAO模型大鼠脑梗死皮层中miR-186的表达显著下降（P<0.05），在N2a细胞氧糖剥夺4h后复氧，miR-186的表达先逐渐下降后升高，复氧12h时miR-186下调最明显（P<0.01）；
2.通过嘌呤霉素筛选构建了稳定过表达和抑制miR-186的N2a细胞株。与空载对照组相比，在过表达细胞株里miR-186表达明显升高（P<0.0001）,在抑制细胞株里miR-186表达显著下调（P<0.01）。
3.miR-186过表达促进细胞增殖、降低细胞毒性、减轻氧化应激、减少细胞凋亡，而相反地，抑制miR-186表达可减缓细胞增殖、增加细胞毒性、加剧氧化应激、促进细胞凋亡。此外，miR-186过表达能减少促凋亡蛋白Bax及Cl-caspase3的表达，增加抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，而抑制miR-186的表达则能增加促凋亡蛋白Bax及Cl-caspase3的表达，抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。
4.双荧光素酶报告基因实验证实miR-186能特异性靶向Hif-1α的3’端非翻译区，从而抑制Hif-1α的表达。
5.敲低Hif-1α的表达可以改善抑制miR-186对OGD/R损伤引起的N2a细胞增殖、细胞毒性、氧化应激及凋亡的影响（P<0.05）。
【结论】：
1．miR-186在缺血性脑卒中大鼠MCAO模型及OGD/R细胞模型中表达均下调。
2．miR-186可以改善OGD/R处理对N2a细胞的损伤，促进细胞增殖，减轻氧化应激，减少细胞凋亡。
3．miR-186可能通过靶向调节Hif-1α在OGD/R致N2a神经细胞缺血性损伤中发挥保护作用。