【摘 要】
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目的:利用抑制性消减杂交技术获得肺腺癌的同源正常组织cDNA片段,从中筛选差异表达基因,从分子水平研究机体抑制肿瘤发生的机制.方法:提取肺腺癌及同源正常组织总RNA并逆转录
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目的:利用抑制性消减杂交技术获得肺腺癌的同源正常组织cDNA片段,从中筛选差异表达基因,从分子水平研究机体抑制肿瘤发生的机制.方法:提取肺腺癌及同源正常组织总RNA并逆转录为双链cDNA,将正常组织cDNA用RasⅠ消化后分成两等份并在两端分别连接上相应的适配子(tester cDNA),与过量的用RasⅠ消化后肺腺癌组织双链cDNA(driver cDNA)进行杂交.获得的正常组织特异性cDNA片段经巢式PCR扩增后与T/A克隆载体连接建立正常组织cDNA文库,再进行斑点杂交,筛选出仅在正常组织特异表达的基因片段进行测序并与GenBank中的序列进行同源性比较.经Northern杂交验证有意义的差异表达基因片段的来源.结果:在肺腺癌同源正常组织中,获得12个差异表达基因片段,4个差异表达基因分别与细胞因子信号抑制蛋白2(SOCS2)、自然杀伤组7(NKg7)、核受体转录协同激活分子1(NCOA1)、半乳糖脑苷酯酶(GALC)的基因具有较高同源性.8个未知功能的差异表达基因与人类不同染色体的不同区域有较高的同源性,其生物学功能还有待于进一步研究.结论:利用抑制性消减杂交技术可有效获取正常组织特异性表达的基因片段,筛选出的四种差异表达基因的产物可能通过不同途径发挥促进细胞凋亡的作用.推测肺癌同源正常组织中存在凋亡相关基因,它们可能通过多种途径促进细胞凋亡而抑制细胞异常增殖,从而达到抑制肿瘤发生的目的.
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