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近年来植物内生真菌已经成为活性天然产物挖掘的热点。本研究对分离自药用植物白木香和南方红豆杉中的内生真菌进行了抗肿瘤等生物活性筛选,并对白木香内生真菌Fimetariella rabenhorstii和南方红豆杉内生真菌Phomopsis sp.进一步开展了化学成分研究。
从出产名贵中药材沉香的药用植物白木香中分离到23株内生真菌菌株并对它们进行抗肿瘤、抗菌活性筛选和化学成分TLC对比检测。在此基础上,选择次生代谢产物丰富且抗神经癌活性强的A20菌株,即F.rabenhorstii作为进一步研究对象。对菌株A20进行液体发酵,发酵菌丝体以95%乙醇提取,提取物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行分步萃取,发酵液用乙酸乙酯进行萃取。对萃取各部分进行抗肿瘤活性跟踪,发现除发酵菌丝体萃取后剩余水部分没有活性外,其余各部位都有一定的抗肿瘤作用。采用硅胶柱层析、反相柱层析、凝胶柱层析等方法相结合对各部分进行化学成分分离纯化,其中从石油醚部位分离到5个化合物,从正丁醇部位分离到8个化合物,从发酵液部位分离到2个化合物。运用现代光谱(IR、ESIMS、HRESIMS、1D NMR、2D NMR)技术鉴定分离到的15个化合物的结构,其中包括4个甾醇类化合物:5a,8a-桥氧-(22E,24R)-麦角甾-6,22-二烯-3B醇(Al)、3B,6B,7a-三羟基-(24R)-麦角甾-8(14),22-二烯(A2)、3B,5a,9a-三羟基-(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-6-酮(A3)、3B,5a,6B-三羟基-(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯(A4):5个核苷类化合物:尿嘧啶(A5)、尿嘧啶核苷(A6)、腺嘌呤核苷(A7)、2-O-甲基腺嘌呤核苷(A8)、2-脱氧腺苷(A9);以及6个其他结构类型化合物:frabcnol(A10)、对羟基苯乙醇(All)、D-半乳糖醇(A12)、烟酸(A13)、2-苯胺基-1,4-萘醌(A14)、乙酰苯胺(A15)。所有化合物均是首次从Fimetariella属真菌中分离获得,其中化合物A10为新化合物,此化合物与沉香组成成分a-humulene和caryophyllene在结构上存在一定生源相关性。化合物A15在天然产物中较为少见。另外对除A8、A13之外的其余化合物进行了抗肿瘤活性评价,发现化合物A1、A2具较显著抗肿瘤活性,它们对肿瘤细胞MCF-7的IC50分别为13.6 ug/ml,15.5 ug/ml,化合物A2具有抗肿瘤活性为首次发现。
从南方红豆杉中分离出22株内生真菌并对它们进行抗肿瘤、抗菌活性筛选和化学成分TLC对比检测。在此基础上,选择代谢产物丰富,抗肿瘤活性强的A240菌株,即Phomopsis sp.作为进一步研究对象。对A240菌株进行大量发酵,对发酵产物硅胶柱层析组分进行活性测试,发现组分Pl0抗神经癌肿瘤细胞SF-268活性好并具有抗金黄色葡萄球菌活性,组分P3、P4对白色念珠菌有抑制作用,组分P5对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有抑制作用。采用硅胶柱层析,反相柱层析,凝胶柱层析对发酵物浸膏进行分离纯化,从中分离鉴定出10个化合物,运用现代光谱技术及TLC检测鉴定了这些化合物的结构,分别为:△9⑽-佛术烯-11,12,13-醇(B1)、交链孢酚(B2)、5-羟基交链孢酚(B3)、3,4,8-三羟基-1-四氢萘酮(B4)、4,8-二羟基-1-四氢萘酮(B5)、5-羟基-7-甲氧基-4,6-二甲基-1(3H)-异苯并呋喃酮(B6)、对羟基苯乙醇(B7)、3B,5a,6B-三羟基-(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯(B8)、5a,8a-桥氧-(22E,24R)-麦角甾-6,22-二烯-3B-醇(B9)、尿嘧啶(B10)。除化合物B2、B8-B10外,化合物B1和B3-B7均为首次从Phomopsis属真菌中分离获得,其中化合物B1为新化合物,化合物B3为新天然产物。