【摘 要】
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枯草芽孢杆菌LD-8547是本实验室分离保存的溶栓酶高产菌株，将具有高溶栓酶活性的枯草芽孢杆菌进行培养，利用(NH4)2SO4沉淀、Sephadex G-100柱层析对该酶发酵液进行分离纯化，获得
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枯草芽孢杆菌LD-8547是本实验室分离保存的溶栓酶高产菌株，将具有高溶栓酶活性的枯草芽孢杆菌进行培养，利用(NH4)2SO4沉淀、Sephadex G-100柱层析对该酶发酵液进行分离纯化，获得了纯度较高的溶栓酶。以四肽底物Sue-Ala-Ala-Pro-Phe-PNA作为该酶的底物，测定了该酶的酶活。
测得该酶的最适pH值和温度分别为8.0和45℃，同时显示出亲水性及强溶栓活性。Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Cu2+、Fe3+对溶栓酶有一定的抑制作用，Mn2+、Ba2+对溶栓酶有较强的抑制作用，Zn2+、Al3+可提高溶栓酶的活性。并研究了几种有机溶剂对其活性的影响，结果表明，甲醇对溶栓酶表现为抑制作用，在10％-15％浓度范围时，其抑制作用明显加强；乙醇在低浓度时对酶活略有激活作用，但随浓度的增大则转变为较强的抑制作用。异丙醇对酶活表现为激活作用，可使酶活提高约70％。
利用PCR方法从枯草芽孢杆菌LD-8547的总DNA中扩增出豆豉溶栓(DFE)成熟肽编码区片段。将溶栓酶的编码基因克隆到表达载体pET32a(+)中并转化到E.coli BL21(DE3)中，从而构建了pET32a-DFE重组质粒。IPTG诱导表达大量蛋白，经亲和纯化，得到较纯的重组溶栓酶蛋白。将所得的酶液经过体外抗凝血和溶栓实验，证明该溶栓酶具有明显的溶血栓作用。
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摘要：“探究教学”的教学方法是基于学生探究学习的一种开放性的教学方法，改变了教师的教学方式和学生的学习方式，对推进思想政治课的教学改革产生了重要影响。思想政治课运用“探究教学”，必须关注学生知识与技能、情感态度与行为的表现，实施策略主要有：创设新奇情境，激发探究兴趣；发挥教师的主导作用，激发学生的主体作用；采用恰当的探究形式，组织开展问题探究活动。 关键词：初中政治；探究教学 一、创设友爱、融
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