论文部分内容阅读
肌钙蛋白复合物由肌钙蛋白C、肌钙蛋白I和肌钙蛋白T三个不同的亚基组成，在Ca2+作用下，主要参与肌肉的收缩调节。肌钙蛋白I作为一个亚单位主要抑制肌球蛋白ATP酶的活性。心肌肌钙蛋白I不在任何骨骼肌组织中表达，具有心肌组织特异性，这使得其成为检测心肌损伤最好的生化标志物之一。研究表明急性心肌梗死患者胸痛发生的早期心肌肌钙蛋白I就被释放入血流，14～36小时其浓度达到最高峰。心肌损伤后的3～7天仍能检测到心肌肌钙蛋白I水平的升高。因此，心肌损伤的检测可通过检测血清中心肌肌钙蛋白I的水平来进行，并且具有灵敏度高、特异性强和诊断窗口期长的特点。进一步研究表明急性冠脉综合症死亡风险与心肌肌钙蛋白I的水平具有相关性。在一些非致死的心肌损伤、充血性心衰等心脏疾病中也检测到心肌肌钙蛋白I水平的升高。目前，心肌肌钙蛋白I已成为临床上诊断心肌损伤的“金标准”。
本研究的目的是制备重组人心肌肌钙蛋白I(recombinant human cardiac troponinI，rhcTnI)的单克隆抗体，并对其特性进行鉴定，为cTnI诊断试剂盒的研制奠定基础。
利用已构建的基因工程菌株，大量表达、纯化重组目的蛋白。纯化后的目的蛋白作为抗原常规免疫Balb/c小鼠，取其脾细胞与同系骨髓瘤细胞Sp2/0进行常规融合，甲基纤维素半固体培养基法筛选杂交瘤细胞株，利用ELISA、Western blotting等方法鉴定单克隆抗体的性质。
筛选出3株稳定分泌抗重组目的蛋白抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为4B3、7D5和3E6，所产生单克隆抗体的免疫球蛋白类及亚类分别为IgG1(4B3、7D5)和IgG2b(3E6)。单克隆抗体与重组目的蛋白发生特异性结合，而与空白菌、LDH、CK、CK—MB无特异性交义反应，单克降抗体的亲和常数分别为1.76×109 L/mol、1.43×109 L/mol和1.04×109 L/mol。
综上所述，成功获得了亲和力高、特异性好的单克隆抗体。