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目的：
非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是肝脏的代谢综合症，已成为目前全球最常见的慢性肝病，但发生发展机制目前仍不清楚。胰岛素样生长因子1（IGF1）是调节新陈代谢的重要因子，GH/IGF1轴是IGF1的上游信号通路，可通过调节脂质代谢、胰岛素抵抗、氧化应激等因素参与NAFLD发病。近年来微小RNA（miRNA）作为调控细胞活动的重要因子，受到关注并成为NAFLD发病和治疗的研究热点，研究发现miRNAs可以通过调控IGF1信号通路参与肝癌等肿瘤形成，肝癌是NAFLD的严重并发症，两者具有许多共同的发病机制，探讨GH/IGF1轴的作用并发掘调控GH/IGF1轴的miRNAs对探讨NAFLD的发病机制及寻找治疗靶点有重要作用。本研究通过临床及基础研究明确GH/IGF1轴在NAFLD疾病中的重要作用及对脂代谢的可能调控机制，并通过实时荧光定量PCR以及运用生物信息软件等技术探讨在NAFLD中参与对GH/IGF1轴调控的miRNAs。
方法：
体内实验：收集NAFLD患者及健康对照者血清并通过ELISA法测定血清IGF1、IGFBP3水平，明确GH/IGF1轴在NAFLD患者中的异常。
体外实验：
1.采用游离脂肪酸（FFA）诱导L02细胞建立NAFLD细胞模型，并测定NAFLD细胞中GH/IGF1轴中基因GHR、IGF1、IGFBP3的基因和蛋白表达变化，以及脂基因FASN、SREBP-1C、PPAR-γ的基因表达变化。
2.采用不同浓度rhGH、rhIGF（25ng/ml rhGH组、250ng/ml rhGH组、50ng/ml rhIGF1组及500ng/ml rhIGF1组）分别对L02细胞及NAFLD细胞进行干预并测定甘油三酯（TG）水平，GHR、IGF1、IGFBP3及脂基因FASN、SREBP-1C、PPAR-γ的基因表达变化。
3.通过Targetscan、mirBase、miRanda的miRNAs预测软件筛选出与GH/IGF1轴相关，且在NAFLD中异常表达的miRNAs。
4.在L02细胞、NAFLD细胞、不同浓度rhGH、rhIGF1干预下的细胞中测定筛选出的miRNAs变化并确定需验证的miRNA.
5.验证miRNA对GH/IGF1轴的影响及对NAFLD的影响。
结果：
1.NAFLD患者的血清IGF1水平下降，IGFBP3水平升高，血清IGF1与ALT、AST、FFA、IR、Fin呈负相关。
2.NAFLD细胞中，GHR基因表达上调，IGFBP3基因表达下调，FFA诱导48h后IGF1、IGFBP3蛋白水平下调，不同浓度rhGH、rhIGF1干预后，NAFLD细胞中GHR、IGF1、IGFBP3基因表达低于L02细胞，干预24h时，两组细胞TG水平均升高。
3.NAFLD细胞中，脂基因PPAR-γ水平上调，不同浓度rhGH、rhIGF1干预后PPAR-γ不同程度的下调。
4.通过在线数据库筛选出miR-16、miR-122、miR-224、miR-206、miR-1290，其中miR-1290在NAFLD细胞中表达上调，并可被rhGH、rhIGF1明显抑制。
结论：
GH/IGF1轴在NAFLD中可能受抑制，并可能通过影响脂代谢基因PPAR-γ参与NAFLD发病；FFA与GH/IGF1轴之间可能存在负反馈调节；miR-1290在NAFLD中表达上调，并可能参与调控GH/IGF1轴。
非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是肝脏的代谢综合症，已成为目前全球最常见的慢性肝病，但发生发展机制目前仍不清楚。胰岛素样生长因子1（IGF1）是调节新陈代谢的重要因子，GH/IGF1轴是IGF1的上游信号通路，可通过调节脂质代谢、胰岛素抵抗、氧化应激等因素参与NAFLD发病。近年来微小RNA（miRNA）作为调控细胞活动的重要因子，受到关注并成为NAFLD发病和治疗的研究热点，研究发现miRNAs可以通过调控IGF1信号通路参与肝癌等肿瘤形成，肝癌是NAFLD的严重并发症，两者具有许多共同的发病机制，探讨GH/IGF1轴的作用并发掘调控GH/IGF1轴的miRNAs对探讨NAFLD的发病机制及寻找治疗靶点有重要作用。本研究通过临床及基础研究明确GH/IGF1轴在NAFLD疾病中的重要作用及对脂代谢的可能调控机制，并通过实时荧光定量PCR以及运用生物信息软件等技术探讨在NAFLD中参与对GH/IGF1轴调控的miRNAs。
方法：
体内实验：收集NAFLD患者及健康对照者血清并通过ELISA法测定血清IGF1、IGFBP3水平，明确GH/IGF1轴在NAFLD患者中的异常。
体外实验：
1.采用游离脂肪酸（FFA）诱导L02细胞建立NAFLD细胞模型，并测定NAFLD细胞中GH/IGF1轴中基因GHR、IGF1、IGFBP3的基因和蛋白表达变化，以及脂基因FASN、SREBP-1C、PPAR-γ的基因表达变化。
2.采用不同浓度rhGH、rhIGF（25ng/ml rhGH组、250ng/ml rhGH组、50ng/ml rhIGF1组及500ng/ml rhIGF1组）分别对L02细胞及NAFLD细胞进行干预并测定甘油三酯（TG）水平，GHR、IGF1、IGFBP3及脂基因FASN、SREBP-1C、PPAR-γ的基因表达变化。
3.通过Targetscan、mirBase、miRanda的miRNAs预测软件筛选出与GH/IGF1轴相关，且在NAFLD中异常表达的miRNAs。
4.在L02细胞、NAFLD细胞、不同浓度rhGH、rhIGF1干预下的细胞中测定筛选出的miRNAs变化并确定需验证的miRNA.
5.验证miRNA对GH/IGF1轴的影响及对NAFLD的影响。
结果：
1.NAFLD患者的血清IGF1水平下降，IGFBP3水平升高，血清IGF1与ALT、AST、FFA、IR、Fin呈负相关。
2.NAFLD细胞中，GHR基因表达上调，IGFBP3基因表达下调，FFA诱导48h后IGF1、IGFBP3蛋白水平下调，不同浓度rhGH、rhIGF1干预后，NAFLD细胞中GHR、IGF1、IGFBP3基因表达低于L02细胞，干预24h时，两组细胞TG水平均升高。
3.NAFLD细胞中，脂基因PPAR-γ水平上调，不同浓度rhGH、rhIGF1干预后PPAR-γ不同程度的下调。
4.通过在线数据库筛选出miR-16、miR-122、miR-224、miR-206、miR-1290，其中miR-1290在NAFLD细胞中表达上调，并可被rhGH、rhIGF1明显抑制。
结论：
GH/IGF1轴在NAFLD中可能受抑制，并可能通过影响脂代谢基因PPAR-γ参与NAFLD发病；FFA与GH/IGF1轴之间可能存在负反馈调节；miR-1290在NAFLD中表达上调，并可能参与调控GH/IGF1轴。