【摘 要】
：
四氢嘧啶（1，4，5，6-四氢-2-甲基-4-嘧啶羧酸）是微生物合成的一类重要的相容性溶质，在微生物适应环境渗透压的变化过程中发挥了重要的作用。研究表明，四氢嘧啶具有稳定蛋白质、核酸、
论文部分内容阅读
四氢嘧啶（1，4，5，6-四氢-2-甲基-4-嘧啶羧酸）是微生物合成的一类重要的相容性溶质，在微生物适应环境渗透压的变化过程中发挥了重要的作用。研究表明，四氢嘧啶具有稳定蛋白质、核酸、生物膜以及整个细胞的功能，可以增强细胞在多种逆境（如高盐、热、干燥和冷冻等）中的耐受性。因此，四氢嘧啶其在医学、美容以及生物技术等众多领域展现出重要的应用价值和广泛的应用前景。传统四氢嘧啶生产利用嗜盐微生物作为生产菌株，通过高盐和低盐的反复转换生产四氢嘧啶，该方法也被称为“细菌挤奶法”。为了克服高盐环境对设备的腐蚀以及简化生产工艺，近年来人们也尝试将四氢嘧啶合成途径引入非嗜盐微生物中，利用普通微生物合成四氢嘧啶。然而，这些工程菌的四氢嘧啶合成效率都很低，远不能达到工业化生产的要求。 本研究选择来源于四氢嘧啶高产菌株Halomonaselongata的四氢嘧啶合成基因簇ectABC，将其导入大肠杆菌K12系列菌株BW25113中，构建了四氢嘧啶高产菌株。通过引入以天冬氨酸和甘油为底物的全细胞催化方法，实现了四氢嘧啶在大肠杆菌中的高效分泌。在摇瓶水平上使用5OD/mL的细胞体系对四氢嘧啶的转化条件进行了优化:转化液的最佳组成为100mM天冬氨酸钠、100mM氯化钾、100mM甘油、100mM磷酸钠缓冲液(pH7.0);最佳转化温度为30℃。转化24小时胞外四氢嘧啶的产量从1.56mg/mL提高到2.67mg/mL。对重组大肠杆菌四氢嘧啶合成途径中的限速步骤的分析结果表明:大肠杆菌内源的天冬氨酸激酶(Ask)能够满足四氢嘧啶高效合成的需要;L-二氨基丁酸转氨酶(EctB)的表达量决定了四氢嘧啶的合成效率。为了满足工业化生产的需要，在发酵罐中对四氢嘧啶全细胞催化工艺进行了放大，当细胞浓度为20 OD/mL时，转化24小时，四氢嘧啶的产量达到25.1g/L，单位菌体的合成量达到4048mg/g CDW，为目前已报道的最高水平。循环转化实验表明，重组细胞至少可以连续使用三次，每升菌体的四氢嘧啶总合成量达到63.4g。最终建立并优化了四氢嘧啶下游纯化工艺，获得了纯度超过99％的四氢嘧啶晶体。本研究彻底突破了四氢嘧啶异源合成中低产的瓶颈，在四氢嘧啶的规模化生产中具有重要的应用价值。对大肠杆菌B系列菌株Red同源重组时同源臂的长度对同源重组效率的影响进行了分析。结果表明虽然重组效率远低于K系列菌株，当同源臂为100bp时即可在BL21(DE3)中发生同源重组。另外还发现重组基因在大肠杆菌中整合表达时，在T7启动子的调控下2拷贝的整合基因即可达到pET系列多拷贝质粒的表达水平，为大肠杆菌生产重组蛋白提供了新的策略。
其他文献
磁悬浮轴承是通过磁场力在定子和转子之间没有机械接触的情况下,实现转子悬浮的一种新型支承轴承,在航空航天、机械工业及生命科学等领域具有非常广阔的应用前景。磁悬浮平台通过力的平衡实现悬浮状态,即电磁力的大小可以克服平台自身重力等外力时,若电磁力大于自身重力时就可以调整悬浮气隙。这是一种发展迅速的无接触无润滑的支承技术,是将多种学科如传统的控制、电气、机械工程等融为一体的典型机电一体化技术。重载磁悬浮平
本文根据传统的遗传算法中的交叉变异操作,提出了一种新型的改进粒子群优化(PSO)算法,对电网规划的模型进行了研究,提出一种以经济型为目标函数的模型。利用改进粒子群算法对该模型进行了深入研究,分析研究了哈尔滨市电网的结构现状,并将哈尔滨市松北地区前进变附近的线路系统对改进粒子群的优化算法进行优化计算,结果显示了改进算法具有的优良特性,本文主要做了以下工作：(1)建立了以经济为目标函数的电网模型,确定
不放氧光合作用主要存在于光合细菌中。与进行放氧光合作用的高等植物、藻类和蓝细菌不同，进行不放氧光合作用的光合细菌中只含有一种反应中心，Ⅰ型反应中心或Ⅱ型反应中心，并且
随着传统化石能源的逐渐枯竭,全球环境问题的日益严峻,集中大电网输电事故的频发,分布式电源(DG)以其灵活、经济和环保等优势,已经成为全球电力行业一个研究的热点领域,受到广泛的关注和应用。分布式发电具有良好的环境效益,对于解决特殊用户供电需求或负荷变化时的电量具有其显著地灵活和可靠性优势,同时对传统大电网的稳定性起到辅助和支撑作用。但由于分布式发电技术中,大部分都直接与地区电网相连,因各自容量、并网
本文研究了中压辐射型配电网中由电压波动引起的电能质量和可靠性问题，意在提高加纳AkuapimRidge地区电能质量水平和可靠性水平。该地区的配电网连接到加纳国家电网已有35年的
SARS冠状病毒(SARS—CoV)是一种新型的冠状病毒,其基因组大小约为30,000nt,为单股正链RNA。病毒基因中的1-72个核苷酸为前导序列。核衣壳(Nucleocapsid,N)蛋白是冠状病毒的主
莽草酸代谢途径(shikimic acid pathway)是植物、微生物用于合成三种芳香族氨基酸苯丙氨酸、络氨酸、色氨酸的途径，中间代谢产物莽草酸还可用于合成维生素、己二酸等化合物。
随着环境问题和能源危机的日益显著,普通照明作为全球主要的耗能系统之一也更多地引起了人们的重视。和普通照明产品相比,LED作为一种清洁高效的绿色环保型产品得到了越来越多的应用。然而,LED和传统照明产品不同的是其需要额外的直流驱动电源以提供恒定直流,因此研究并设计一种高效、环保、具成本优势的LED驱动电源成为近年来的热点。单级功率因数校正器的应用使得电源产品的效率得到了一定程度的提升,原边控制技术的
近年来我国电网电压水平不断改善,但在一些地区依然存在电压合格率较低和网损较大的状况。近年来海南东部尤其是琼中地区小水电上网对全网的电压质量产生了重大的影响,亟需寻求合适的无功优化控制方案,改善系统无功分布,提高电压质量。无功优化是一个混合整数规划问题,把发电机出力、变压器分接头档位、无功补偿量作为控制变量,寻找目标函数的最优解。目标函数可以是电压合格率最高、网损最小等等。本文通过搜集海南东部电网的
细胞周期在维持生物体正常结构与功能这方面起到很重要的作用，并且受到精确的调控。这一调控主要通过蛋白质激酶介导的信号转导方式完成，其中cyclinE-CDK2在细胞周期G1/S期的转