一氧化氮对中华绒螯蟹免疫活性的影响

• 作 者: 宋秀梅
• 机 构: 苏州大学
• 出 处: 苏州大学
• 发表日期: 2010年期
• 关键词: 一氧化氮 一氧化氮合酶 中华绒螯蟹 免疫

本文通过体内注射几种不同类型微生物和病原菌体外孵育血细胞,检测了NOS活性和NO浓度的变化,结果表明,中华绒螯蟹血细胞存在可诱导的NOS,催化生成的NO与机体免疫有相关性。NOS抑制性试验显示,EDTA、L-NAME显著地抑制了病原菌对血细胞NOS活性的诱导,而SMT对NOS的抑制作用不明显,推测中华绒螯蟹可诱导NOS在结构上可能更接近于哺乳动物组成型NOS。在相同NO浓度下,当外源NO单独作用时对细菌的生长无显著影响,而当外源NO与血细胞共同作用时这种NO显著地增强了血细胞的抑菌活性。为深入探讨NO对中华绒螯蟹免疫相关指标的影响,将一定浓度SNP注射到蟹体内,在不同时间点取样,检测免疫相关指标的变化。将SNP与血细胞体外共育2h,然后检测NO对血细胞吞噬活性和血细胞聚集菌体能力的影响。向蟹体内注射SNP,定时取样,通过半定量RT-PCR的方法检测外源NO对抗菌肽crustins mRNA表达的影响。结果表明,外源NO对不同类型血细胞数(DHC)有显著影响,例如,在一定时间内100μmol/L SNP导致颗粒细胞减少,而小颗粒细胞和无颗粒细胞有所增加;不同浓度外源NO对免疫相关酶活性的影响不同,如100μmol/L SNP对酚氧化酶、碱性磷酸酶活性诱导效果显著,100μmol/L和500μmol/L SNP均能使酸性磷酸酶和溶菌酶活性增强,而1000μmol/L SNP最终抑制了多种酶的活性;500μmol/L以上的SNP能显著增强了血细胞聚集菌体的能力;20μmol/L SNP能增强血细胞吞噬活性,当大于500μmol/L时表现为吞噬活性抑制性;100μmol/L SNP会诱导抗菌肽crustin III的短暂表达,在注射12h后crustin III表达量增加,24h后恢复到对照组水平,而对crustin I表达量无明显变化。本研究首次探讨了中华绒螯蟹血细胞NOS的性质,较为系统地研究了NO对以中华绒螯蟹为代表的甲壳动物免疫活性的影响。总的来说,NO因浓度不同对中华绒螯蟹免疫相关指标的影响不同,适当浓度的外源NO能在一定程度上增强中华绒螯蟹对微生物的免疫防御能力。