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目的:探讨压疮组织细胞中iNOS和eNOS的表达和细胞凋亡情况及其与压疮难愈性的关系,分析压疮难愈性的可能机制。
材料和方法:
①标本的采集及分组:在患者知情同意的情况下取9例患有Ⅲ度压疮病人的压疮皮肤组织,按压疮溃疡中心基底部组织、溃疡边缘组织、正常皮肤组织进行分组对照:正常皮肤组织为Ⅰ组,溃疡边缘组织为Ⅱ组,溃疡中心基底部组织为Ⅲ组。
②实验方法与目的:对切片进行HE染色,观察压疮组织所发生的病理学变化;对切片进行免疫组织化学染色(SP法),观察压疮组织内iNOS、eNOS的表达情况;DNA原位缺口末端标记法(TUNEL)检测压疮组织中凋亡细胞情况。
③结果判定:iNOS、eNOS抗原阳性表达位于细胞浆,细胞浆呈黄色或棕黄色;凋亡细胞阳性表达位于细胞核,细胞核呈黄色或棕黄色。每张切片中随机选择5个视野(x400倍率)观察阳性细胞分布和着色情况,用Image-prol-plus6.0计算机图像分析技术检测阳性细胞表达的强弱。
④统计分析:采用SPSS13.0统计软件:采用单因素方差分析对计量资料进行统计学处理;变量间关系用直线相关分析;数据以(x±s)表示;以P<0.05为有统计学意义。
结果:iNOS、eNOS在正常皮肤组织、溃疡边缘组织、溃疡基底部组织中的表达:
①正常皮肤组织:iNOS主要在表皮、皮脂腺、毛囊等处表达,正常血管内皮细胞很少表达。eNOS在表皮中表达较弱,皮下仅少数毛细血管的内皮细胞有表达;
②溃疡边缘皮肤组织:iNOS在表皮表达较正常皮肤表皮弱,皮脂腺、毛囊处表达增强,出现血管内皮细胞的表达,真皮层基质内大量炎症细胞(单核巨噬细胞为主)表达呈阳性;eNOS在表皮全层细胞均有表达,真皮组织中的各种血管内皮细胞均呈阳性表达,其它细胞少见阳性;
③溃疡中心的基底部:iNOS在肉芽组织中表达呈强阳性,主要表达在各种新生血管内皮细胞以及炎症细胞中。eNOS在成纤维细胞以及肉芽组织中的各种血管内皮细胞呈强阳性表达。iNOS、eNOS在溃疡组织中的表达有如下规律:溃疡边缘组织表达强于正常皮肤组织,溃疡中心基底部组织强于溃疡边缘组织,阳性细胞的积分光密度值各组间两两比较差异有显著性(P值均<0.01)。
凋亡细胞在正常皮肤组织、溃疡边缘组织及溃疡中心组织中的分布情况:压疮溃疡中心组织以及边缘组织出现了大量的表皮基底层细胞、血管内皮细胞、及成纤维细胞的大量凋亡,且溃疡中心组织中凋亡细胞数目多于溃疡边缘组织,正常皮肤组织细胞凋亡较少(P值均<0.01)。
各组皮下组织中细胞凋亡情况与iNOS和eNOS的表达有明显相关关系(r=0.601,r=0.610)。
结论:
①溃疡中心和边缘组织中,炎症细胞和血管内皮细胞均能见到iNOS的高表达,由血管内皮细胞等非炎症细胞中过表达的iNOS催化产生的大量NO可以导致胶原产生和细胞增殖减少,阻止创面修复。
②压疮溃疡中心及边缘组织中高表达的eNOS导致血管过度扩张致使微血管内皮损伤、渗出液增多加重了局部组织水肿,延缓压疮创面的愈合。
③压疮溃疡中心及边缘组织中和修复密切相关的细胞(表皮基底层细胞、血管内皮细胞以及成纤维细胞)大量凋亡可能会引起细胞外基质特别是胶原产生发生障碍,延缓压疮溃疡的愈合。
④压疮溃疡中心和边缘皮肤组织中iNOS、eNOS的表达量与凋亡细胞量呈正相关,两者共同阻碍了压疮愈合。