黄芩素对人肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠移植瘤的作用机制及其临床意义探讨

来源 :泸州医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yinje2004_2005
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目的:通过将肝癌细胞株SMMC-7721接种于BALB/C(n/n)裸鼠腋窝皮下,复制人肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠皮下移植瘤模型,观察黄芩素干预对SMMC-7721移植瘤组织结构、凋亡及侵袭和转移的影响,并探讨其可能的机制,为黄芩素应用于临床提供实验依据。方法:1.体外复苏、培养人肝癌SMMC-7721细胞,收集对数生长期的肝癌细胞,将细胞浓度调整到1.5×107/ml,将细胞细胞悬液接种裸鼠腋窝皮下,每只裸鼠接种0.2ml。待成瘤至长径约0.8cm时,对裸鼠进行随机分组并对裸鼠进行编号。实验组裸鼠每天每只腹腔注射黄芩素20mg/kg,连续腹腔注射14d。对照组每天每只腹腔注射二甲亚砜(DMSO)(按黄芩素溶液浓度5mg/ml计算溶解黄芩素所需的DMSO的体积),连续腹腔注射14d。末次用药后24h处死全部裸鼠,充分暴露瘤体使之能被完全剥离,尽快用游标卡尺测量瘤体长径(a)以及短径(b),瘤体积V=(a+b2)/2;瘤体称重,抑瘤率按如下公式计算:抑瘤率(Inhibition Ratio, IR)=(1-实验组瘤重/对照组瘤重)×100%。将做RT-PCR组织放入经0.1%DEPC处理过并经高温高压消毒的冻存管中-80℃冻存备用;将做HE染色及免疫组化的组织用4%中性甲醛固定备用。2.用免疫组化方法检测移植瘤内Ezrin及Survivin蛋白的表达。3.RT-PCR检测移植瘤中Ezrin及Survivin mRNA表达情况。4.HE染色光镜下观察移植瘤的组织结构。5.实验结果用SPSS16.0进行统计分析,以P﹤0.05视为具有统计学意义。结果:1.实验组肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠移植瘤体积及重量均显著小于对照组(P﹤0.05),抑瘤率为20.80%±10.27%。2.光镜观察,实验组移植瘤可见较多均质红染的无结构区域;对照组可见癌细胞巢团状分布,细胞有明显的异型性。3.免疫组化结果示,实验组移植瘤中Survivin、Ezrin蛋白的表达水平与对照组相比明显下调(P﹤0.05)。4.RT-PCR结果示,实验组移植瘤Survivin、Ezrin mRNA表达水平与对照组相比明显下调(P﹤0.05),结果与免疫组化结果一致。结论:1.实验组肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠移植瘤体积和重量都明显小于对照组,说明黄芩素对肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠移植瘤的生长有抑制作用。2.黄芩素可能下调Survivin、Ezrin mRNA和蛋白在人肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠移植瘤中的表达。3.黄芩素下调Survivin的表达降低了Survivin对凋亡的抑制作用,从而促进了肝癌细胞的凋亡。黄芩素下调Ezrin的表达从而抑制了其促进肝癌细胞的侵袭和转移的能力。4.黄芩素有望成为临床治疗肝细胞癌的高效低毒药物。
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