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目的:对水蔓菁中黄酮类成分进行提取、纯化,制备水蔓菁总黄酮,评价水蔓菁总黄酮对前列腺增生小鼠、大鼠模型的疗效,通过测定实验小鼠、大鼠的前列腺湿重、前列腺指数,检测实验小鼠、大鼠血清或前列腺组织中睾酮(T)、雌二醇(E2)、表皮生长因子(EGF)水平,观察前列腺组织形态的变化,从不同角度探讨前列腺增生(BPH)的发病机制,并初步揭示水蔓菁总黄酮对前列腺增生的治疗作用及其机理。
方法:采用乙醇回流提取,聚酰胺柱层析的方法制备水蔓菁总黄酮,并对其进行初步的鉴定和含量测定。采用皮下注射丙酸睾酮(5mg/kg)的方法复制小鼠前列腺增生模型,在造模的同时给予药物处理,阳性对照组给予0.45g/kg的癃闭舒胶囊混悬液灌胃:水蔓菁总黄酮低、中、高剂量组分别给予低、中、高(45、90、180mg/kg)剂量水蔓菁总黄酮混悬液灌胃;空白组与模型组同时给予同体积蒸馏水灌胃,每日1次,连续3周。末次给药后1h,取血,然后处死小鼠,测定小鼠的前列腺湿重、前列腺指数,检测血清中睾酮(T)、雌二醇(E2)水平,观察小鼠前列腺组织形态的变化。采用去势加皮下注射丙酸睾酮(4mg/kg/d)的方法复制大鼠前列腺增生模型,从去势第8天起给予药物处理,阳性对照组给予0.3g/kg的癃闭舒胶囊混悬液灌胃;水蔓菁总黄酮低、中、高剂量组分别给予低、中、高(30、60、120mg/kg)剂量水蔓菁总黄酮混悬液灌胃;空白组与模型组同时给予同体积蒸馏水灌胃,每日1次,连续30天。末次给药后处死大鼠,测定大鼠的前列腺湿重、前列腺指数,检测前列腺组织中睾酮(T)、雌二醇(E2)、表皮生长因子(EGF)水平,光镜下观察大鼠前列腺组织形态的变化,透射电镜观察大鼠前列腺细胞超微结构的变化。
结果:通过显色反应鉴定,水蔓菁提取物中含有黄酮类化合物,经含量测定其中总黄酮含量达91.07%。前列腺增生小鼠、大鼠模型均复制成功,模型动物前列腺湿重、前列腺指数均显著增加,血清或前列腺中睾酮水平均显著升高,雌二醇水平变化不明显或显著降低,前列腺中表皮生长因子水平显著升高,前列腺腺体明显增生,腺体体积增大,间质明显减少,腺上皮呈扁平状排列,超微结构有明显增生性改变。大、中、小剂量的水蔓菁总黄酮可显著或明显降低模型小鼠的前列腺指数(P<0.01 orP<0.05):可显著降低模型小鼠血清中的睾酮水平(P<0.01),大剂量水蔓菁总黄酮可明显升高小鼠血清中的雌二醇水平(P<0.05);大、中、小剂量的水蔓菁总黄酮均可使模型小鼠前列腺腺体体积缩小,数量减少,间质增多,使腺体的体密度下降,比表面值增大。大、中剂量水蔓菁总黄酮均可显著降低前列腺增生模型大鼠的前列腺湿重及前列腺指数(P<0.01);大、中、小剂量水蔓菁总黄酮均可显著降低模型大鼠前列腺中的睾酮水平(P<0.01),显著升高模型大鼠前列腺中的雌二醇水平(P<0.01),显著降低模型大鼠前列腺中表皮生长因子水平(P<0.01);均可使模型大鼠前列腺腺体明显缩小,间质增多,使腺体的体密度下降,比表面值增大,改善前列腺细胞超微结构的变化。结论:实验结果表明,采用95%乙醇提取,聚酰胺柱层析的方法,可以制备纯度较高的水蔓菁总黄酮。水蔓菁总黄酮具有抑制模型动物前列腺增生的作用,可显著减轻模型动物的前列腺湿重合前列腺指数,显著降低模型动物体内睾酮水平,升高雌二醇水平,显著降低模型动物前列腺中表皮生长因子水平,使模型动物前列腺腺体缩小,间质增多,使腺体的体密度下降,比表面值增大,使前列腺细胞超微结构的病变得到改善。推测其作用机制可能与其降低雄激素水平,改善紊乱的雌、雄激素比例,降低前列腺中刺激性生长因子水平等作用有关,通过调控前列腺中的信号分子网络,最终达到抑制前列腺增生的目的。