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目的生殖细胞ATP和肽连接蛋白-2 (ATP and peptide-binding protein in germ cells 2, Apg-2),是一种热休克蛋白(Heat shock proteins, Hsp),属于Hsp110家族成员。我们前期通过蛋白质组学研究发现:稳定表达BCR/ABL的小鼠原B淋巴细胞( BaF3 ) (简称BaF3-BCR/ABL)与空载体感染BaF3对照细胞(简称BaF3-MIGR1)相比,H2O2损伤后Apg-2蛋白表达增高,而至今有关Apg-2在BCR/ABL转化细胞中的作用尚不清楚。本课题拟通过在BaF3-BCR/ABL及BaF3-MIGR1细胞中过表达Apg-2,研究Apg-2过表达在BaF3-BCR/ABL细胞中的作用,旨在探讨Apg-2蛋白在BCR/ABL阳性的慢性粒细胞白血病(chronic myelogeneous leukemia,CML)的发生发展及临床治疗的应用前景。方法将Apg-2基因插入到质粒pIRES2-EGFP,通过酶切和测序鉴定重组表达质粒pIRES2-EGFP- Apg-2。用电穿孔转染法将该表达质粒转染BaF3-BCR/ABL细胞和BaF3-MIGR1对照细胞,经G418筛选稳定表达细胞株,分别用RT-PCR和western blot鉴定Apg-2的表达。FCM分析细胞周期和凋亡,Am-Blue检测细胞增殖,克隆形成实验观察细胞生长,western-blot检测Bcl-2和Bax蛋白表达。H2O2处理后用Am-Blue检测细胞活力,并检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,western-blot和免疫荧光检测H2O2损伤细胞后组蛋白H2AX丝氨酸139位点磷酸化(γ-H2AX)水平和焦点数。结果(1)成功构建真核表达质粒pIRES2-EGFP- Apg-2,转染和筛选出稳定表达Apg-2的BaF3-BCR/ABL细胞株( BaF3-BCR/ABL-Apg-2 )和BaF3-MIGR1对照细胞株(BaF3-MIGR1-Apg-2);(2)Apg-2过表达能促进BaF3-BCR/ABL细胞周期进程,增加细胞增殖和克隆形成,抑制BaF3-MIGR1细胞周期进程,减少细胞增殖和克隆形成;而对其细胞凋亡无明显作用;(3)Apg-2过表达明显明高H2O2损伤后BaF3- BCR/ABL细胞细活率,减少细胞细损伤,减少LDH释放,降降MDA含量,明高SOD活性,从而保保细胞免保H2O2诱导的细胞损伤,抑制γ-H2AX表达和焦点形成,减少BaF3- BCR/ABL细胞氧化应氧诱导的DNA损伤。结论本研究阐明了Apg-2过表达可促进BaF3-BCR/ABL细胞增殖和克隆形成,保保BaF3-BCR/ABL细胞免保H2O2诱导的细胞损伤,减少H2O2诱导的DNA损伤,可能与BCR/ABL相互作用参与DNA损伤修复,为阐明Apg-2在CML的DNA损伤修复中的作用明供了实验依据。