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胎盘含有丰富的生物活性物质,是传统稀缺滋补中药。现代药理研究与临床应用均表明其具有抗感染、调节体液免疫、治疗神经衰弱等作用。研究发现羊胎盘的营养组成最接近人胎盘,成为人类利用动物胎盘的首选种类。
现代医学手段对羊胎盘的成分分析,发现其主要成分是蛋白、多种激素、酶、细胞因子、生长因子和微量元素等,其中蛋白质含量占干重的80％以上。本研究针对羊胎盘加工和利用效率低下的现状,以健康羊胎盘为原料,通过超声提取制备具有免疫活性的羊胎盘肽,确定了超声技术辅助提取羊胎盘肽基本工艺;运用蛋白酶水解处理提取后的羊胎盘蛋白,并通过喷雾干燥和冻干粉干燥制备具有抗氧化活性的蛋白粉,实现了羊胎盘蛋白质的高值综合利用。主要结论如下:
1、羊胎盘具有天然免疫调节活性胎盘肽。本文以提高细胞增殖率为目标,采用响应面曲面法优化超声法制备羊胎盘肽的提取工艺,各因素变量影响细胞增殖率的二次多元回归方程为:Y=53.48-0.69X1+1.305X2-0.39X3-3.48X12+0.19X1X2+1.21X1X3-0.54X22+1.84X2X3-1.26X32;影响次序为:超声功率＞固液比＞超声时间。最优工艺参数:超声功率300W,固液比1:30,超声作用时间25min,体外淋巴细胞试验表明其提取的胎盘肽的细胞增殖率为53.11%。并通过比较生理盐水提取、反复冻融、超声辅助提取及超高压等不同方法提取胎盘免疫活性物质,得知超声技术提取能较好的保留羊胎盘肽的免疫活性。
2、以提取羊胎盘肽后蛋白质为原料,通过不同蛋白酶水解研究得到羊胎盘下脚料蛋白质水解液,最佳条件下对羊胎盘下脚料的酶解效果表明:中性蛋白酶＞胰蛋白酶＞复合蛋白酶＞木瓜蛋白酶＞碱性蛋白酶＞风味蛋白酶。在单酶水解实验的基础上进一步采用双酶(复合)水解,表明双酶水解较单酶水解,其DH及YASP均有所提高,并且双酶同时添加的效果优于先后添加;木瓜蛋白酶和中性蛋白酶同时添加水解为双酶水解的最佳组合,正交试验确定其最佳水解条件为:酶解温度45℃、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶活比1:1、酶解时间3h、pH7.0。
3、针对得到的多肽带有较明显的苦味现实,利用风味蛋白酶改善水解的风味。加入风味蛋白酶水解物的苦味下降,并有利于提高水解能力。
4、利用喷雾干燥和冷冻干燥方法对羊胎盘下脚料蛋白水解液的进行干燥,制备羊胎盘下脚料多肽粉(冻干粉、喷雾干燥包埋粉、喷雾干燥未包埋粉),并对得到的三种干燥粉的性质对比研究。(1)羊胎盘下脚料多肽粉的抗氧化性结果表明,冻干粉、喷雾干燥包埋粉、喷雾干燥未包埋粉对不同自由基的清除能力均与其浓度相关。对·OH的清除效果环糊精包埋粉＞未包埋粉＞冻干制粉;而对DPPH·、02-·清除能力表明冻干制粉的效果优于环糊精包埋粉和未包埋的喷雾干燥粉。(2)免疫试验结果表明细胞增殖率为:冻干粉＞环糊精包埋粉＞未包埋胎盘粉。(3)对多肽粉的加工性能测定表明:喷雾干燥制备的多肽粉气味及色泽均优于冻干粉:喷雾干燥粉基本无味,而冻干粉略具腥味;喷雾干燥制备的多肽粉具有较好的吸油能力。喷雾干燥未包埋粉的起泡能力高于环糊精包埋粉,高于冻干粉,而泡沫稳定性:冻干粉＞环糊精包埋粉＞未包埋粉。