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目的：
了解中国血友病A患者凝血因子Ⅷ抑制物发生的流行病学,阐明F8基因缺陷与抑制物产生的关系,探究部分细胞因子调控相关的SNP对血友病A患者抑制物产生的影响,明确一个新突变导致的高滴度抑制物灭活FⅧ的分子机制,揭示vWF在抑制物存在情况下保护FⅧ的机制。
方法：
Nijmegan法和ELISA法分别测定抑制物的活性和含量；多重PCR、长距离PCR结合直接核酸测序检测F8基因缺陷和与细胞因子调控相关的10个SNP及一个CA重复序列多态性；采用活性中和试验和WesternBlotting定位抗体针对的FⅧ表位；FⅧ与不同的FⅧ抗体互相作用,观察vWF的存在与否对FⅧ的影响。
结果：
1435例血友病A患者中,重型1108例,中型249例,轻型78例。FⅧ抑制物阳性患者55人,其中高滴度抑制物患者18人,低滴度抑制物患者37人。阳性患者其免疫球蛋白中IgG占主导地位(阳性率76.4％)；部分患者IgA和IgM阳性,阳性率分别为25.5％和45.5％。在IgG的4个亚类中,IgG4的较高滴度(≥+)患者居多(21/29)。共发现38种不同类型的基因突变,包括F8内含子22倒位(15/55)、内含子1倒位(3/55)、7个大片段缺失(7/55)、14个小缺失或插入突变(14/55)、7个无义突变(7/55)、1个剪接位点突变(1/55)和8个错义突变(8/55)。IL-10基因的-819C/T,-592A/C多态性检测,显示抑制物阳性患者中的-819T及-592A比例明显高于-819C及-592C；对一个血友病A患者Ser470Asn突变造成高滴度抗体形成的研究,中和试验和Western结果均证实抗体的作用位点为FⅧ蛋白的A2和C2片段；vWF对因子Ⅷ的保护作用研究,显示vWF抑制抗FⅧ抗体识别所有的FⅧ表位并呈剂量依赖性地封闭FⅧ与多克隆抗人FⅧ抗体的相互作用。
结论：
本研究首次用大样本对中国汉人血友病A因子Ⅷ抑制物发生的流行病学进行调查,得出血友病A因子Ⅷ抑制物的阳性率为3.8％,明显低于国外同类研究；对抑制物阳性患者F8基因缺陷的研究,发现32种为国际首次报道的与因子Ⅷ抑制物生成相关的新的基因突变；研究提示IL-10基因-819C/T及-592A/C多态性可能与抑制物的产生风险相关,IL-10基因(-819,-592)单倍型可作为预测血友病A抑制物生成危险因素的参考指标之一；在FⅧ抑制物发生时,vWF可以减轻抑制物对FⅧ的灭活作用,临床使用富含vWF的血浆制剂对抑制物可能产生比较好的效果。