磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶在小鼠成釉细胞中表达的免疫组织化学研究

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目的:   成釉细胞是牙釉质形成的关键细胞,它既能合成和分泌釉质基质,又对釉质基质有重吸收和降解的作用。成釉细胞发育过程大致可分为三个阶段:分泌前期、分泌期和成熟期,有许多信号分子参与了成釉细胞发育的调节。小鼠属于啮齿类动物,其切牙可以终生不断生长并持续形成釉质,故认为它是研究成釉细胞发育理想的动物模型。   细胞外信号调节蛋白激酶(Extracellular-signal regulated protein kinase,ERK)是丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases,MAPK)家族中的一员,多种生长因子都可以刺激ERK使其磷酸化,成为活化状态的ERK(p-ERK)。有学者研究表明,ERK活化后可以转移进入细胞核内,调节核内相关基因的表达,影响细胞的增殖、分化、再生和凋亡。而ERK活化后一方面进入细胞核中发挥作用,另一方面停留在细胞质内,磷酸化胞浆内的多种底物,影响细胞内其他信号通路或对自身信号通路产生负反馈调节,从而对细胞的增殖分化和凋亡产生影响。   研究活化状态的ERK在成釉细胞发育过程中的分布和表达情况将有助于我们更深入的了解成釉细胞发育过程中细胞内信号传递的过程和机制。本实验运用免疫组织化学的方法显示并观察p-ERK在小鼠成釉细胞发育过程中的活性变化,探讨其对成釉细胞增殖分化等的影响及作用。   材料和方法:   取出生后14天(P14)的小鼠5只,脊柱脱臼法处死后切取鼠头,分离上下颌骨。将下颌骨置于40g/L的多聚甲醛溶液中于4℃下固定48h,10%EDTA脱钙3~4周,石蜡定向包埋,制作小鼠下颌切牙切片。采用H-E染色以观察成釉细胞的发育变化,以兔抗鼠p-ERK多克隆抗体为一抗进行免疫组织化学染色,在光学显微镜下观察p-ERK在小鼠切牙成釉细胞发育过程中的表达情况。   结果:   在生后14天小鼠下颌切牙可以观察到成釉细胞的全部三个发育阶段;免疫组织化学染色结果显示p-ERK在不同发育时期的成釉细胞中有不同的表达:在分泌前期成釉细胞中微弱表达,几近阴性;在分泌期成釉细胞中p-ERK主要在胞浆部位呈阳性表达,胞核内阳性反应很弱,随着成釉细胞的发育成熟,p-ERK的表达增强,在胞核和胞质内均呈阳性表达。   结论:   1.p-ERK参与了成釉细胞的分化过程。   2.p-ERK参与了成釉细胞的增殖分化过程中基因表达的调控。   3.成熟期成釉细胞中ERK的活化可能与成釉细胞的最终凋亡有关。
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