青娥方延缓衰老作用及机制初探

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目的:  青娥丸主要功能为补肾强腰。传统给药剂型为水蜜丸或大蜜丸,剂量较大。本项目拟对青娥丸中四味药进行提取浓缩,用D-半乳糖致亚急性衰老模型,比较青娥丸及其提取物的抗衰老作用,并初步探讨药理作用发生机制,为其剂型改造提供理论依据,也为抗衰老药物的研发提供参考。  方法:  分别提取浓缩青娥丸的四味中药:盐杜仲(君药)、盐补骨脂(臣药)、核桃仁、大蒜,制成青娥方提取物,HPLC法检测指标成分的含量;在D-半乳糖诱导亚急性衰老小鼠模型中,灌胃给予青娥丸低、中、高剂量和等量的青娥方提取物相应剂量;通过行为学及生化指标的检测研究药物抗衰老作用;采用QPCR和WB法分别检测海马及肾脏衰老、凋亡、氧化应激等相关基因和蛋白表达。  结果:  1)盐杜仲提取物为固体浸膏,盐补骨脂提取物为流浸膏,核桃仁与大蒜提取物均为黄色油状液体。其中杜仲提取物中松脂醇二葡萄糖苷含量为0.42%,补骨脂提取物中补骨脂苷、异补骨脂苷含量分别为1.6%、3.1%,补骨脂素、异补骨脂素含量分别为0.55%、0.41%,补骨脂二氢黄酮0.36%、新补骨脂异黄酮0.69%、补骨脂异黄酮0.06%、补骨脂乙素0.57%、补骨脂二氢黄酮甲醚1.72%、补骨脂定0.12%、补骨脂查耳酮0.31%。  2)行为学实验结果表明,青娥丸及其提取物延长小鼠在转棒仪上停留的时间及避暗实验中的潜伏期;  3)生化指标检测结果显示,青娥丸及其提取物降低血清BUN、CREA、MDA、NO、NOS、TG、ALT、AST含量,升高LDH含量;升高肝脏GSH、T-AOC、T-SOD、CAT含量,降低MDA、NO、NOS含量;升高肾脏T-AOC、T-SOD、CAT含量,降低MDA、NO、NOS含量;  4) QPCR实验结果表明:青娥丸及其提取物升高海马MnSOD、Prdx-3、GLS-2、Klotho、SIRT1、PGC1α、FOX3、IGF-1,及肾脏MnSOD、GPX-1、Klotho、SIRT1、PGC1α、FOX3的基因表达。  5) WB实验结果显示:青娥丸及其提取物提高海马和肾脏Bcl-2、Klotho、SIRT1蛋白表达,降低海马Bax、Caspase-3、P53、P-P53、P-RB、PGC1α和肾脏Bax、Caspase-3、P53、PGC1α蛋白表达。  结论:  1)青娥丸及其提取物可以提高小鼠体力和记忆力,其作用可能与其提高机体抗氧化、抗凋亡和抗衰老作用,从而减轻机体损伤,提高抗疲劳和抗氧化能力,延缓衰老相关。  2)青娥丸可以通过提取浓缩达到降低剂量的作用。
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