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目的： 1. 了解三亚市地区产超广谱β内酰胺酶(Extended Spectrumβ-Lactamases，ESBLs)肺炎克雷伯菌的标本来源、临床分布及耐药情况，为临床合理用药和控制院内感染提供依据； 2. 旨在利用PCR扩增技术对产ESBLs的肺炎克雷伯菌进行耐药基因的扩增，并用测序的方法确定其基因型,了解产ESBLs肺炎克雷伯菌在三亚地区的分子流行病学特点。 方法： 1. 收集三亚市人民医院从2013 年1 月－2014 年12 月间分离的肺炎克雷伯菌，采用Phoenixl00全自动细菌鉴定药敏系统进行药敏试验，依据当年的CLSI 标准判读结果，用WHONET 5.6软件对所有数据进行统计分析。 2. 用聚合酶链反应(PCR)对213株产ESBLs的肺炎克雷伯菌进行常见的几种的耐药基因的检测，并对163株CTX基因阳性的菌株做进一步亚型分析。 3. 所有耐药基因阳性和弱阳性的标本都进行DNA测序，并与GenBank数据库进行对比，确定其基因有无改变。 结果： 1. 临床分离的肺炎克雷伯菌共585株中产ESBLs的有213 株，检出率为36.41%。2. 这些标本主要来源是痰、呼吸道分泌物标本（78.4%）; 其次是分泌物标本（ 8.91%）；中段尿标本占5.2%，血液标本占3.28%，腹水腹腔积液标本最少（0.47%）。主要来自神经外科（20.66%）；肿瘤内科（17.37%）；呼吸内科（16.44%）；老年病科（9.39%）；重症ICU（7.53%）。 3. 对临床常用几类药中头孢噻肟耐药率最高（98.1%）; 哌拉西林次之（94.71%），其他耐药率超过百分之五十的还有头孢吡肟、环丙沙星和头孢他啶，分别为66.43%，65.24%和65.24%。对碳青霉烯类的亚胺培南耐药率为2.86%。对加酶抑制剂的头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦的耐药性分别为29.53%和19.05%。此外非β-内酰胺类抗菌药物如阿米卡星耐药率为8.45%。 4. 共有 195 株能检测到一个或多个耐药基因 CMY,CTX,TEM,SHV,DHA1 和KPC，其检出率分别为6.1%，76.53%，59.62%，76.06%，12.21%和2.82%。选取阳性率最高的CTX-M基因型的菌株共163株进一步做CTX-M-1 (CM3)、CTX-M-2(G2)、CTX-M-8(G8)、CTX-M-9(G9)、CTX-M-25(G25)五个基因亚型分析，其阳性率分别为52.15%；0；2.45%；34.36%；1.23%。 5. 选取所有耐药基因阳性和弱阳性的标本都进行DNA测序，测得的DNA序列与GenBank数据库对比的同源性为100%。 结论： 1.三亚地区产ESBLs肺炎克雷伯菌的检出率为36.41%，主要分离自痰、呼吸道分泌物，以神经外科检出率最高，对常用抗菌药物有一定的耐药性。 2.该地区产ESBLs肺炎克雷伯菌的耐药基因主要是CTX和SHV，其中阳性率最高的CTX的亚型主要为CTX-M-1型。 3.耐药基因测序结果与GenBank数据库的参考序列比对无突变基因。 4.本研究揭示三亚地区产ESBLs菌株的耐药基因的分布，为做好细菌检测及其药敏试验，提高治疗感染的效率，预防医院感染的发生和多重耐药菌的产生提供依据。